Сотона среда

Жидкая питательная среда для культивирования патогенных штаммов микобактерий туберкулеза

Сотона среда

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к культивированию патогенных штаммов микобактерий туберкулеза.

Известна жидкая питательная среда Моделя (Практикум по ветеринарной микробиологии. Москва, 1980, с.92) для выращивания микобактерий туберкулеза, содержащая калий фосфорнокислый двуосновной 0,5 г; аммоний лимоннокислый 1 г; магний сернокислый 0,05 г; железо сернокислое 0,005 г; глицерин 5 мл; дистиллированную воду 100 мл.

Однако при использовании этой среды рост первичных культур микобактерий и процесс накопления бактериальной массы замедленны, среда содержит много компонентов, что усложняет ее приготовление.

Наиболее близкой по сущности заявляемому решению является жидкая среда Сотона (Лабораторная диагностика туберкулеза. Рекомендации, Омск, 1988, с.

59), которая применяется для культивирования микобактерий туберкулеза, состоящая из следующих компонентов: аспарагин, глицерин, а минерально-солевую основу данной среды составляют такие компоненты, как лимонная кислота, калий фосфорнокислый двуосновной, магний сернокислый, цитрат аммиачного железа.

Однако данная среда требует большого количества компонентов, и сроки роста микобактерий на ней не являются оптимальными.

Технической задачей заявляемого изобретения является введение в среду веществ, позволяющих улучшить ростовые свойства среды и сократить сроки выращивания патогенных микобактерий туберкулеза при посевах эталонных штаммов культур микобактерий.

Поставленная техническая задача решается тем, что известная жидкая питательная среда для культивирования патогенных штаммов микобактерий туберкулеза, включающая аспарагин, глицерин и минерально-солевую основу, согласно изобретению дополнительно содержит криалл и сыворотку крови лошадей, а в качестве минерально-солевой основы – вытяжку древесной золы при следующем соотношении компонентов:

1,5%-ная вытяжка древесной золы, мл100
Глицерин6,0 г
Аспарагин0,4 г
Криалл1,0-1,2 г
Сыворотка крови лошади1,0-1,2 г

Приготовление среды производят следующим образом.

В качестве минерально-солевой основы предлагаемой среды используют вытяжку древесной золы, при проведении спектрального анализа которой было обнаружено содержание в ней необходимых для питания микобактерий туберкулеза микроэлементов: серы, магния, железа, цинка, калия и фосфора.

Приготовление вытяжки древесной золы и определение ее оптимальной концентрации производят следующим образом: берут 0,5 г (пример 1); 1,5 г (пример 2) и 3 г (пример 3) древесной золы, просеянной через сито, и доливают до 100 мл дистиллированной водой, выдерживают 3 суток, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, затем – через бумажный, автоклавируют при 1,5 атм 30 мин.

Сроки роста патогенных штаммов микобактерий туберкулеза на среде Сотона и средах с введением вытяжки древесной золы в различных концентрациях представлены в таблице 1.

Таблица 1
СредыПатогенные штаммы микобактерий
М.bovis(шт.8,ВИЭВ)M.tuberculosis (шт.H37Rv)
Рост, (сутки)
появлениеинтенсивныйпоявлениеинтенсивный
Сотона14221122
Пример 1 (0, 5% вытяжка древесной золы)14221222
Пример 2 (1, 5% вытяжка древесной золы)1020818
Пример 3 (3% вытяжка древесной золы)13221120

Проведенные испытания показывают, что наиболее оптимальной для получения ускоренного роста патогенных штаммов микобактерий туберкулеза является вытяжка древесной золы 1,5%-ной концентрации, которую в дальнейшем используют в качестве минерально-солевой основы предлагаемой среды.

Далее предлагаемую среду готовят следующим образом. Растворяют каждый ингредиент среды в растворе 1,5%-ной вытяжки золы, причем последующий ингредиент добавляют после полного растворения предыдущего. Пропускают через бумажный фильтр и разливают по колбам.

Устанавливают рН в пределах 7,0-7,2 при помощи 10%-ной ортофосфорной кислоты. Стерилизуют в автоклаве текучим паром при 120°С в течение 30 минут.

В качестве биологически активных добавок в предлагаемую среду дополнительно вводят криалл (заявка на патент №94011513/15 «Способ получения торфогуминового удобрения», авторы Алексеев А.С., Кривопуцкий B.C., Кривопуцкая Л.М) и сыворотку крови лошадей.

Для контроля во всех примерах используют среду Сотона.

Для подтверждения оптимальной концентрации криалла в составе предлагаемой среды проводят следующие исследования.

Пример 4. В среду, состоящую из аспарагина 0,4 г, глицерина 6,0 г, 1,5% вытяжки древесной золы, добавляют криалл в количестве 0,5-0,7 г.

Пример 5. Для культивирования микобактерий туберкулеза готовят среду, состоящую из аспарагина, глицерина в известных количествах, вытяжки древесной золы в оптимальной концентрации 1,5% и криалла в количестве 1,0-1,2 г.

Пример 6. Для культивирования микобактерий туберкулеза готовят среду, состоящую из аспарагина, глицерина в известных количествах, вытяжки древесной золы в оптимальной концентрации 1,5% и криалла в количестве 1,5-1,7 г.

Результаты испытания питательных сред, приготовленных в примерах 4, 5 и 6, представлены в таблице 2.

Таблица 2
СредыПатогенные штаммы микобактерий
M.bovis (шт.8, ВИЭВ)M.tuberculosis (шт. H37Rv)
Рост, (сутки)
появлениеинтенсивныйпоявлениеинтенсивный
Сотона14221120
Пример 4 (1,5% вытяжка древесной золы, криалл 0,5-0,7 г)14241522
Пример 5 (1,5% вытяжка древесной золы, криалл 1,0-1,2 г)14201120
Пример 6 (1, 5% вытяжка древесной золы, криалл 1,5-1,7 г)16241622

Для подтверждения оптимальной концентрации сыворотки крови лошадей в составе предлагаемой среды проводят следующие исследования.

Пример 7. Для культивирования микобактерий туберкулеза готовят среду, состоящую из аспарагина 0,4 г, глицерина 6,0 г, вытяжки древесной золы в оптимальной концентрации – 1,5% и сыворотки крови лошадей в количестве 0,5-0,7 г.

Пример 8. Для культивирования микобактерий туберкулеза готовят среду, состоящую из аспарагина, глицерина в известных количествах, вытяжки древесной золы в оптимальной концентрации – 1,5% и сыворотки крови лошадей в количестве 1,0-1,2 г.

Пример 9. Для культивирования микобактерий туберкулеза готовят среду, состоящую из аспарагина, глицерина в известных количествах, вытяжки древесной золы в оптимальной концентрации – 1,5% и сыворотки крови лошадей в количестве 1,5-1,7 г.

Результаты испытания питательных сред, приготовленных в примерах 7,8 и 9, представлены в таблице 3.

Таблица 3
СредыПатогенные штаммы микобактерий
M.bovis (шт. 8, ВИЭВ)M.tuberculosis (шт. H37Rv)
Рост, (сутки)
появлениеинтенсивныйпоявлениеинтенсивный
12345
Сотона14221120
Пример 4 (1,5% вытяжка древесной золы, сыворотка крови лошадей 0,5-0,7 г)14221220
Пример 5 (1,5% вытяжка древесной золы, сыворотка крови лошадей 1,0-1,2 г)1219915
Пример 6 (1,5% вытяжка древесной золы, сыворотка крови лошадей 1,5-1,7 г)12211120

Для подтверждения оптимального соотношений заявленных ингредиентов в испытуемой среде проводят следующие исследования.

Пример 10. В среду, состоящую из аспарагина 0,4, глицерина 6,0, 1,5% вытяжки древесной золы, добавляют криалл в количестве 0,5-0,7 г и сыворотку крови лошадей в количестве 0,5-0,7 г.

Пример 11. Для культивирования микобактерий туберкулеза готовят среду, состоящую из аспарагина, глицерина в известных количествах, вытяжки древесной золы в оптимальной концентрации 1,5%, криалла в количестве 1,0 – 1,2 г и сыворотки крови лошадей в количестве 1,0 – 1,2 г.

Пример 12. Для культивирования микобактерий туберкулеза готовят среду, состоящую из аспарагина, глицерина в известных количествах, вытяжки древесной золы в оптимальной концентрации 1,5%, криалла в количестве 1,5-1,7 г и сыворотки крови лошадей в количестве 1,5 – 1,7 г.

Результаты испытания питательных сред, приготовленных в примерах 10, 11 и 12, представлены в таблице 4.

Таблица 4
СредыПатогенные штаммы микобактерий
M.bovis (шт.8, ВИЭВ)M.tuberculosis (шт. H37Rv)
Рост, (сутки)
появлениеинтенсивныйпоявлениеИнтенсивный
Сотона14221120
Пример 4 (1,5% вытяжка древесной золы, криалл 0,5-0,7 г, сыворотка крови лошадей 0,5-0,7 г)12191119
Пример 5 (1,5% вытяжка древесной золы, криалл 1,0-1,2 г, сыворотка крови лошадей 1,0-1,2 г)814612
Пример 6 (1,5% вытяжка древесной золы, криалл 1,5-1,7 г, сыворотка крови лошадей 1,5-1,7 г)14221221

Из полученных данных следует, что сокращение сроков появления первичного и интенсивного роста микобактерий туберкулеза происходит при использовании в составе опытных сред вытяжки древесной золы 1,5%-ной концентрации, 1,0-1,2 г криалла и 1,0-1,2 г сыворотки крови лошадей.

На основании проведенных исследований установлено, что предлагаемая жидкая питательная среда, в состав которой входит минеральный комплекс и биологические добавки, позволяет стимулировать рост патогенных штаммов микобактерий туберкулеза.

Жидкая питательная среда для культивирования патогенных штаммов микобактерий туберкулеза, включающая аспарагин, глицерин и минерально-солевую основу, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит криалл и сыворотку крови лошадей, а в качестве минерально-солевой основы – вытяжку древесной золы при следующем соотношении компонентов:

Вытяжка древесной золы 1,5%100 мл
Глицерин6,0 г
Аспарагин0,4 г
Криалл1,0-1,2 г
Сыворотка крови лошадей1,0-1,2 г

Источник: //findpatent.ru/patent/230/2300559.html

Синтетические питательные среды

Сотона среда

Более или менее сложные субстраты, необходимые для нормального развития исследуемых микробов и состоящие из химически чистых строго дозированных веществ, служащих для культивируемых микроорганизмов источниками азота, углерода, энергии, а также витаминов и минеральных солей.

В качестве источников азота в ряде случаев могут служить аммонийные соли минеральных или органических кислот (сернокислый или лимоннокислый аммоний и др.); хорошими источниками углерода и энергии являются сахара (глюкоза и др.). Реактивы для изготовления синтетических питательных сред подвергают специальной предварительной очистке (перекристаллизация и пр.).

Для приготовления синтетических питательных сред лучше пользоваться водой, деионизированной в дистилляторе с ионообменными смолами или перегнанной в присутствии марганцовокислого калия в аппаратах из нейтрального стекла.

Вязкость, рН, окислительно-восстановительный потенциал и осмотическое давление синтетических питательных сред должны обеспечивать оптимальные условия жизнедеятельности исследуемых бактерий.

Для приготовления плотных синтетических питательных сред добавляют агар-агар, тщательно очищенный от примесей минеральных и органических соединений.

Синтетические питательные среды применяют для культивирования ряда микробов с целью изучения протекающих в них процессов метаболизма, ассимиляции питательных веществ, для выяснения механизмов биосинтеза токсинов, антибиотиков, ферментов, пигментов и других биологически активных веществ, а также для исследования действия антибиотиков, витаминов, незаменимых аминокислот и других препаратов на развитие бактерий (Бактериальные факторы роста).

Синтетические питательные среды находят широкое применение и в качестве основы для культивирования тест-микробов при микробиологических методах определения аминокислот и витаминов в различных субстратах, а также для определения значения тех или иных веществ б питании бактерий и пр.

При культивировании ряда микробов, особенно во время выделения из организма возбудителей инфекционных заболеваний, синтетические питательные среды пока не могут заменить среды, содержащие пептоны, экстракты и другие соединения, химический состав которых еще точно не определен (Дифференциально-диагностические среды, Питательные среды). Это объясняется недостаточным знанием метаболизма и питательных потребностей многих бактерий, что препятствует созданию синтетических питательных сред из химически чистых соединений.

По мере изучения физиологии бактерий количество синтетических питательных сред будет возрастать.

Наряду с использованием в научных исследованиях и практической работе по микробиологии синтетические питательные среды применяют при культивировании тканей и клеток in vitro (Культура тканей), в частности при диагностике и изучении вирусов.

Синтетические питательные среды применяют и для приготовления вакцин (BCG и др.), бактериофагов и пр.

Профилактические и лечебные препараты, приготовляемые при помощи синтетических питательных сред, характеризуются большей чистотой по сравнению с препаратами, получаемыми с использованием сред с пептонами и экстрактами.

Ниже приводятся прописи некоторых синтетических питательных сред.

Универсальная среда Барроу для выращивания различных штаммов брюшнотифозных бактерий, в %

(NH4)2SO4 – 0,5

NaCl – 0,05

KH2PO4 – 0,2

Источник углерода (глюкоза, глицерин или молочная кислота) – 0,1

Аминокислоты: аланин, аргинин, аспарагиновая кислота, beta-аланин, валин, гистидин, глицин, глютаминовая кислота, лейцин, лизин, метионин, оксипролин, пролин, серин, треонин, триптофан, фенилаланин – по 0,05; тирозин – 0,02, цистин – 0,001

Синтетическая среда для выращивания дизентернйных бактерий, в г (по В. Л. Троицкому и В. Д. Геккер)

КН2РO4 – 1,0

Na2HPO4 – 1,0

NaCl – 5,0

Na2CO3 (безводн.) – 2,0

MgSO4 – 0,1

Глюкоза – 5,0

Лимоннокислый аммоний (двузамещен.) – 4,5

Никотиновая кислота – 0,005

Триптофан – 0,05

Цистин – 0,1

Дистиллированная вода, в мл – 1000

рН = 7,4.

Среда Мюллера для выращивания дифтерийных бактерий, в мг

L – цистин – 70

DL-валин – 200

DL-метионин – 60

L-тирозин – 50

L-пролин – 75

L-аспарагиновая кислота – 500

D-глютаминовая кислота (хлористоводородная соль) – 750

Этиловый спирт, в мл – 0,7

Молочная кислота – 1,75

Пимелиновая кислота – 0,015

Никотиновая кислота – 0,23

Бета-аланин – 0,2

КСl – 40

Na2HPO4 – 300

MgSO4 x 7H2O – 100

CuSO4 x 5H2O – 0,5

СаСO3 (в НС1) – 20

FeSO4 x 7H2O – 0,5

MnCl2 x 4H2O – 0,25

ZnO (в НС1) – 0,25

Вода, в мл до – 100

Среда Рао для выращивания палочки чумы, в мг

DL-пролин – 140

DL-фенилаланин – 214

L-цистин – 80

DL-аланин – 120

D-глютаминовая кислота – 100

Глицин – 100

L-тирозин – 128

DL-серин – 140

DL-изолейцин – 130

DL-лейцин – 180

DL-метионин – 150

DL-валин – 130

Бактериальная зола, эквивалентная 50 мг бактерий 1/30 М фосфатный буфер с рН = 7,4, в мл – 50-100

Вода, в мл – до 1000

Из аминокислот незаменимыми являются пролин, фенилаланин и цистин; остальные аминокислоты только стимулируют рост чумного микроба.

Модифицированная среда ВКЛ для выращивания культуры BCG, в г

Глицин – 5

Аспарагин – 0,5

Глицерин (уд. в. 1,17705), в мл. – 20

Глюкоза – 4

Лимоннокислый натрий – 2

Лимонная кислота – 0,65

К2НРO4 – 5

NaCl – 5

MgSO4 – 1

PeSO4 (закись) – 0,05

ZnSO4 (1% раствор), в мл – 1

Дистиллированная вода, в мл – 1000

рН = 7,0-7,1.

Среда Сотона для выращивания микобактерий туберкулеза, в г

Аспарагин – 4

Лимонная кислота – 2

Лимоннокислое аммиачное железо – 0,05

MgSO4 x 7H2O – 0,5

К2НРO4 – 0,5

Глицерин – 60

Дистиллированная вода, в мл – 200

Растворяют при подогревании, фильтруют через бумагу, к фильтрату добавляют еще 800 мл дистиллированной воды, подщелачивают аммиаком до рН = 7,2 и стерилизуют при t°115° 30 мин.

Н. Плоскирев

Источник: //mysteryvirus.ru/viral-news/413-synthetic-nutrient-mediums.html

Патогенные микобактерии – Ф. К. Черкес [1986 Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. – Микробиология]

Сотона среда

НОВОСТИ    БИБЛИОТЕКА    КАРТА САЙТА    ССЫЛКИ    О САЙТЕ

Представители семейства микобактерий Mycobacteriaceae имеют вид тонких, иногда ветвистых палочек, чем напоминают гриб. Медленный рост на питательных средах также сближает их с грибами. Эти особенности объясняют название семейства, рода – Mycobacterium.

Микобактерий кислото-щелоче- и спиртоустойчивы, что обусловливается наличием в оболочках их клеток жировосковых веществ.

Род микобактерий включает патогенных и непатогенных представителей. Патогенными для человека являются возбудители туберкулеза и возбудитель лепры.

Туберкулез широко распространен среди животных, птиц, грызунов.

Существуют несколько видов туберкулезных палочек:

1. Человеческий – Mycobacterium tuberculosis

2. Бычий – Mycobacterium bovis

3. Птичий – Mycobacterium avium

4. Мышиный – Mycobacterium murium

5. Встречаются микобактерий, вызывающие заболевания у холоднокровных. К ним относится особая группа атипичных микобактерий.

В настоящее время атипичные микобактерий приобретают особое значение. Их делят по ряду признаков на 4 группы: I, II, III, IV (по Раньону). Они отличаются от микобактерий туберкулеза меньшей требовательностью к питательным средам.

Между собой они различаются по отношению к питательным средам, скорости роста, по способности образовывать пигмент, а также по каталазной и пероксидазной активности. Вызывают заболевания у человека представители групп I и III.

Морфология. Возбудители туберкулеза были открыты р. Кохом в 1882 г. Это тонкие палочки величиной 1,5-4 × 0,3-0,5 мкм. Они очень полиморфны: встречаются прямые, изогнутые, колбовидные. Как результат изменчивости бактерий, имеются кислотоподатливые формы и очень мелкие, так называемые зерна Муха.

Разнообразие форм нередко зависит от состава среды, воздействия на них антибиотиков и химиотерапевтических средств. Бактерии туберкулеза неподвижны, не имеют спор и капсул. Грамоположительны, однако они плохо воспринимают анилиновые краски. Хорошо окрашиваются в красный цвет по методу Циля- Нильсена (см. рис.

4), где используются концентрированные краски и протравливание.

Культивирование. Возбудители туберкулеза – аэробы. Растут при температуре 37-38° С и рН среды 5,8-7,0, Отличительными культуральными особенностями туберкулезной палочки являются медленный рост и требовательность к питательным средам. Первично они растут только на специальных средах: среде Петраньяни, Петрова, Левенштейна – Йенсена.

Их можно выращивать на глицериновом бульоне, глицериновом агаре, глицериновом картофеле. Глицерин стимулирует рост микобактерий. М. bovis не нуждаются в глицерине. Наибольшее распространение получила среда Левенштейна – Йенсена, которая рекомендована ВОЗ в качестве стандартной среды для выращивания туберкулезных палочек.

В настоящее время пользуются также средой Финна II, которая отличается от среды Левенштейна – Йенсена тем, что вместо аспарагина в ней используется глутамин натрия. На этой среде микобактерий туберкулезарастут несколько быстрее, чем на среде Левенштейна – Йенсена, и процент выделения культур выше.

Туберкулезные палочки можно культивировать и на синтетических средах, например среде Сотона.

Микобактерий туберкулеза встречаются в R- и S-форме. Более вирулентной является R-форма (М. bovis чаще встречается в R-форме).

На плотных питательных средах возбудители туберкулеза образуют сухие морщинистые колонии кремового цвета с чуть приподнятым Центром и изрезанными краями (см. рис. 26).

В жидких питательных средах микобактерий туберкулеза вырастают на 10-15-й день в виде пленки, которая постепенно утолщается, становится грубой, морщинистой, ломкой и в силу тяжести иногда падает на дно. Бульон под пленкой остается прозрачным.

Ферментативные свойства. Возбудители туберкулеза биохимически мало активны. У них обнаружен протеолитический фермент, который в определенных условиях (кислая и щелочная среда) расщепляет белок. Они расщепляют также некоторые углеводы, образуют уреазу. Но свойства эти непостоянны. Поэтому изучение ферментов не имеет диагностического значения.

Токсинообразование. Возбудители туберкулеза образуют эндотоксин – это белковое вещество впервые выделил Р. Кох (1890) и назвал его туберкулином. “Старый” туберкулин – это культуральная жидкость, полученная при росте культуры в глицериновом бульоне и выпаренная при 70° С до 1/10 своего первоначального объема. “Новый” туберкулин – очищенный белковый дериват туберкулина.

Туберкулин обладает свойствами аллергена. Он не оказывает токсического действия на здоровый организм. Его действие проявляется только в зараженном организме. Поэтому введение туберкулина используют с диагностической целью, в постановках аллергических проб (Пирке или Манту). Для этой цели туберкулин готовят из бычьего типа микобактерий туберкулеза.

Вирулентные штаммы возбудителей туберкулеза содержат особый липид корд-фактор, который способствует склеиванию микобактерий и росту их в виде кос и тяжей.

Антигенная структура. Микобактерий туберкулеза содержат антиген, в который входят белковые, липоидные и полисахаридные факторы. Этот антиген вызывает в организме выработку антител (агглютининов, преципитинов, комплементсвязывающих веществ и др.). Однако эти антитела обнаруживаются в малых концентрациях, поэтому практически с целью диагностики мало используются.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Микобактерий туберкулеза самые устойчивые из неспороносных форм бактерий (устойчивость обусловливается наличием в их оболочке липидов). Температуру 100° С они переносят в течение 5 мин. УФ-лучи вызывают их гибель только через несколько часов.

В высохшей мокроте они живут до 10 мес. При низких температурах микобактерий туберкулеза длительно сохраняются.

Дезинфицирующие растворы: сулема (1:1000), карболовая кислота (5%) губят их только через сутки. Наиболее чувствительны они к хлорамину и хлорной извести.

Восприимчивость животных. К М. tuberculosis человек очень чувствителен, животные и птицы малочувствительны. Из экспериментальных животных к нему высокочувствительны морские свинки, у которых инфекция протекает генерализованно и заканчивается обычно гибелью животного.

К M. bovis чувствительны крупный и мелкий домашний скот и домашние животные (человек малочувствителен, но дети могут заражаться при использовании молока больных животных).

Из экспериментальных животных наиболее чувствительны кролики, у которых инфекция протекает генерализованно. М. avium вызывает заболевание у птиц: кур, голубей, фазанов и т. д. Однако могут болеть и некоторые животные (человек редко заражается).

Из экспериментальных животных чувствительны кролики. Инфекция протекает у них остро.

Мышиный вид патогенен главным образом для полевок. У кроликов и морских свинок заболевание протекает в хронической форме.

Источники инфекции. Человек. Реже животные.

Пути передачи. Наиболее частые пути передачи – воздушно-капельный и воздушно-пылевой; реже пищевой. Возможно внутриутробное инфицирование через плаценту.

Заболевания у человека и патогенез. Заболевание туберкулезом характеризуется многообразием клинических форм. Различают легочную (наиболее часто встречающуюся) и внелегочные формы: туберкулез желудка и кишечника, почек, мозговых оболочек, костей и других органов.

Каждая из этих форм может закончиться генерализацией процесса. При воздушно-капельном и воздушно-пылевом заражении первичный очаг возникает в легком. В пораженном органе образуется бугорок – tubercul.

Бугорок представляет собой скопление лейкоцитов и гигантских клеток, внутри которых находятся микобактерий туберкулеза. При хорошей сопротивляемости организма соединительная ткань окружает бугорок, он обызвествляется и бактерии, оставаясь жизнеспособными, не выходят за пределы бугорка.

Таков “очаг Гона” – обызвествленный, небольшой очаг на месте первичного внедрения туберкулезной палочки (закрытый процесс).

При закрытом процессе палочки туберкулеза не выделяются с мокротой, мочой и др.

Таким образом, даже при доброкачественном течении процесса организм не освобождается от возбудителей туберкулеза. Считают, что 80% людей инфицированы туберкулезными бактериями. Однако клинически они здоровы.

Когда организм попадает в неблагоприятные условия, защитные функции его снижаются, бугорок подвергается некрозу, бактерии высвобождаются и вовлекают в процесс новые участки, наступает обострение, образуются каверны – открытый процесс. Иногда может быть генерализация процесса, которая приводит организм к гибели.

Чаще туберкулез протекает в хронической форме (закрытый процесс). Большое значение при обострении имеют условия труда и быта.

Иммунитет. Человек обладает определенной резистентностью, т. е. при заражении не всегда возникает заболевание, а образуется инфекционный (нестерильный) иммунитет, который обусловливается комплексом защитных факторов: гуморальных, клеточных, а также резистентностью органов и тканей.

Профилактика. Ранняя диагностика, изоляция и т. д. Для специфической профилактики используется живая вакцина БЦЖ (BCG), полученная французскими учеными Кальметтом и Гереном. Эту вакцину вводят новорожденным однократно, внутрикожно в наружную поверхность плеча. Ревакцинацию проводят через 7-12 лет, а затем через каждые 5-6 лет до 30 лет.

Лечение. Антибактериальные препараты: стрептомицин, рифампицин, ПАСК, фтивазид и др.

Контрольные вопросы

1. Кем и когда был открыт возбудитель туберкулеза?

2. На какие типы делится туберкулезная палочка? Какой тип патогенен для человека?

3. Что обусловливает устойчивость микобактерий туберкулеза?

4. Каким методом окрашивают мазки для обнаружения туберкулезных микобактерий?

5. На какие формы диссоциируют микобактерий туберкулеза и какая форма является патогенной?

Микробиологическое исследование

Цель исследования: выявление возбудителя.

Материал для исследования

1. Мокрота (туберкулез легких и бронхов).

2. Экссудат из плевральной полости (туберкулез легких, плевры).

3. Асцитическая жидкость и кал (кишечная форма туберкулеза).

4. Моча (туберкулез почек).

5. Спинномозговая жидкость (туберкулезный менингит).

6. Кровь (генерализация процесса).

Способы сбора материала

Способы сбора материала

Примечание. Баночки для сбора материала должны быть с завинчивающимися пробками. Посуду для сбора материала стерилизуют в автоклаве при 120° С в течение 20 мин или кипячением в течение 1 ч.

Основные методы исследования

1. Бактериоскопический.

2. Люминесцентный.

3. Бактериологический

4. Биологический.

5. Аллергический.

Ход исследования

Ход исследования

Контрольные вопросы

1. На каких питательных средах выращивают микобактерии туберкулеза и какова длительность их роста?

2. Чем и для чего обрабатывают мокроту до посева ее на питательные среды?

3. Опишите рост туберкулезной палочки на плотной и жидкой питательных средах.

4. Какое животное является наиболее чувствительным к человеческому типу туберкулезной палочки?

Питательные среды

Среда Левенштейна – Йенсена: солевой раствор; однозамещенный фосфат калия – 2,4 г; магния сульфат – 0,24 г; магния цитрат 10,6 г; аспарагин – 3,6 г; глицерин – 12 мл; картофельная мука – 5 г; вода дистиллированная – 600 мл.

Реактивы растворяют в указанной последовательности при слабом подогреве и стерилизуют 2 ч текучим паром. Солевая основа может быть приготовлена с запасом на 3-4 нед.

Яичная масса.

24-27 (в зависимости от величины) свежих диетических яиц моют проточной теплой водой, щеткой с мылом, погружают на 30 мин в 70% спирт, затем над спиртовкой в боксе разбивают стерильным пинцетом в колбу с бусами, хорошо размешивают и к 1 л яичной массы добавляют 600 мл солевого раствора. Смесь фильтруют через марлевый фильтр, добавляют 20 мл стерильного 2% раствора малахитового зеленого и разливают в пробирки по 5 мл. Свертывание производят при 85° С в течение 45 мин.

Среда Финна II. Солевая основа: магния сульфат – 0,5 г; натрия цитрат – 1 г; квасцы железоаммиачные – 0,05 г; калия фосфат однозамещенный – 20 г; аммония цитрат однозамещенный – 20 г; натрия глутамат однозамещенный – 5 г; глицерин – 20 мл; вода дистиллированная – до 1 л.

Ингредиенты растворяют в указанном порядке в теплой дистиллированной воде. Устанавливают рН 6,3-6,5. Стерилизуют при 1 атм 20 мин.

Яичная среда. 12 яиц моют щеткой с мылом, обрабатывают спиртом.

Разбивают стерильным пинцетом и выливают в стерильную колбу с бусами, которую после добавления каждого яйца встряхивают до образования однородной массы.

Добавляют 10 мл 20% водного раствора малахитового зеленого и 300 мл солевого раствора. Фильтруют через марлевый фильтр и свертывают при температуре 85° С в течение 30 мин.

Синтетическая среда Сотона. К 200 мл дистиллированной воды добавляют 4 г аспарагина, 0,5 г цитрата железа, 2 г лимонной кислоты, 0,5 г сульфата магния, 0,5 г основного фосфата калия, 60 г глицерина, 800 мл дистиллированной воды.

Источник: //biologylib.ru/books/item/f00/s00/z0000015/st040.shtml

Ваш Недуг
Добавить комментарий