рибонуклеопротеин (ribonucleoprotein, rnp)

CRISPR 101: Ribonucleoprotein (RNP) delivery

рибонуклеопротеин (ribonucleoprotein, rnp)

CRISPR has greatly enhanced the ability of scientists to make genomic alterations, bringing about a revolution in genome engineering, with new techniques rapidly being developed.

Performing a CRISPR experiment requires delivery of, at minimum, two components: the Cas9 protein and a guide RNA (gRNA) targeting your genomic site of interest. This is commonly performed by transfecting cells with a plasmid, such as PX459, which encodes Cas9 and contains a site for inserting a custom gRNA.

 While this methodology has proven to be incredibly valuable to scientists, there are some potential complications that must be considered when using this method:

  1.     Cells must be amenable to transfection or viral transduction
  2.     Appropriate promoters must be chosen for both Cas9 and gRNA expression  
  3.     Plasmid DNA may be incorporated into the genome
  4.     Off-target effects can occur due to prolonged Cas9 expression
  5.     The requirement for Cas9 transcription and translation delays editing

Cas9-gRNA ribonucleoproteins

One alternative approach, which avoids many of these complications, is to directly deliver a ribonucleoprotein (RNP), consisting of the Cas9 protein in complex with a targeting gRNA, to your cells of interest. We introduced RNPs on the Addgene blog a few years ago, but we'll describe the process of using RNPs in more detail here.

There are many advantages to using RNPs for CRISPR experiments. The RNP method can often be used in cells that are difficult to transfect, such as primary cells.

Using RNPs can also alleviate difficulties with protein expression that occur in cells where common eukaryotic promoters (such as CMV or EF1A promoters found in many CRISPR plasmids) are not expressed.

Lastly, because this method does not require the delivery of foreign DNA, and the Cas9-gRNA RNP is degraded over time, using RNPs may limit the potential for off-target effects.

As with plasmid based techniques, RNPs can be used to deliver Cas9 variants and to direct homology directed repair (HDR).

In the former, modified versions of nuclease dead (dCas9) are used for a variety of experimental purposes, such as modifying gene expression, without altering the genome.

 In HDR experiments, Cas9-gRNA RNPs are used in combination with a template DNA to generate a specific mutation at a genomic site of interest. As new CRISPR techniques and tools are developed, it is ly that RNPs will play a major role in the application of these approaches.

Preparing the Cas9-gRNA RNP

The first step in this type of CRISPR experiment is the generation of the RNP complex.  While one option is to purchase the Cas9 protein and a gRNA from a commercial vender, this can often be expensive. An alternative approach is to express and purify His- Cas9 from E.

coli using a plasmid such as pET-28b-Cas9-His from Alex Schier’s Lab. gRNAs can be in vitro transcribed from ssDNA, which can be generated by commercial vendors such as IDT. These two components are then incubated together to form the RNP.

Detailed protocols outlining these steps have been made publicly available by both the Jacob Corn and Alex Schier laboratories.

Delivering Cas9-gRNA RNPs 

An advantage of performing CRISPR experiments using RNPs is the variety of methods that can be used to deliver a Cas9-gRNA RNP. This advantage has allowed scientists to perform in vitro and in vivo CRISPR studies in experimental systems that may not be amenable to plasmid based methods.

One of the most common techniques for delivery of RNPs is electroporation (A in the figure above), which generates pores in the cell membrane, allowing for entry of the RNP into the cytoplasm.

In addition to the use of this technique in cell culture, it has also been applied to genome editing of mouse zygotes, through a process known as CRISPR-EZ (CRISPR RNP Electroporation of Zygotes) (Chen et al. 2016).

For CRISPR experiments that involve HDR, electroporation can be combined with cell-type specific reagents in a technique known as nucleofection, which forms pores in the nuclear membrane, allowing for entry of a DNA template.

Multiple methods have been developed to enable Cas9-gRNA RNP-based genome editing in vivo. Though these techniques are in the early stages of development, they may serve as the basis for the use of CRISPR to treat genetic diseases.

David Liu’s Lab has demonstrated the use of cationic lipid-mediated methods (B in the figure above) to deliver Cas9-gRNA RNPs to hair cells in the mouse inner ear (Zuris et al. 2015).

A more targeted approach using RNPs has recently been described in vitro, with the hope of eventually using this method for in vivo applications.

This technique utilizes Cas9 proteins harboring receptor ligands (C in the figure above), which result in the internalization of Cas9-gRNA RNPs by specific cell types (Rouet et al. 2018). This was accomplished using a Cas9 mutant (Cas9M1C/C80S) that harbors two surface exposed cysteines, including the native C547, allowing for ligation to pyridyl disulfide-activated ligands.

Due to the concerns of off-target mutations and transgene integration in crops, delivery of Cas9-gRNA RNPs to plants, as an alternative to plasmid based techniques, has been an area of intense study. Two methods to accomplish this are Polyethylene Glycol (PEG) mediated transfection of protoplasts and biolistic bombardment of immature embryos (Liang et al.

2017).  PEG-mediated methods, while technically less difficult to perform, often show low efficiency, while biolistic bombardment, which can have high efficiency, requires specialized equipment, such as a gene gun. Depending on the nature of the experiment, it is up to the researcher to determine which method is most appropriate for a given experiment.

Considerations for RNP-mediated CRISPR experiments

While using Cas9-gRNA RNPs for CRISPR experiments can reduce many potential complications, there are additional factors to take into account with these types of experiments. One important consideration is that the Cas9-gRNA RNP will be degraded by the cell over time.

As a result, RNP mediated CRISPR experiments may not be suitable for experiments where stable Cas9 expression is required, such as when a Cas9 fusion to a fluorescent protein is used to label nucleic acid targets.  While Cas9-gRNA RNPs show promise for in vivo studies, little is known about the immunogenicity and stability of the Cas9 protein in the host.

Indeed, research has shown that a Cas9 protein from Geobacillus stearothermophilus is more stable in human plasma than the standard spCas9 (Harrington et al. 2017). Lastly, as with any scientific research, choice of a technique often comes down to the researcher’s familiarity with different systems.

 Using Cas9-gRNA RNPs in your experiments can require steps such as protein expression and purification, which will require additional laboratory reagents, equipment, and expertise.

Final thoughts

The Cas9-gRNA RNP method provides scientists with an additional means to deliver CRISPR components to their experimental systems of interest. Using this method can alleviate many issues that may arise when using plasmid based systems, most notability the ability to perform CRISPR studies in cells that are difficult to transfect or transduce.

While using Cas9-gRNA RNPs may require the production of the Cas9 protein and a gRNA in your laboratory, once these have been acquired, genomic editing can be performed rapidly and, in many cases, with reduced chance for off-target effects.

As the CRISPR field continues to evolve, it is ly that the use of RNPs will play an important role in its continued advancement.

Andrew Hempstead is a Senior Scientist at Addgene.  Andrew's interests include genome engineering and microbiology.

References

1. Chen, Sean, et al. “Highly efficient mouse genome editing by CRISPR ribonucleoprotein electroporation of zygotes.” Journal of Biological Chemistry (2016): jbc-M116. PubMed PMID: 27151215. PubMed Central PMCID: PMC4938170.

2. Zuris, John A., et al. “Cationic lipid-mediated delivery of proteins enables efficient protein-based genome editing in vitro and in vivo.” Nature biotechnology 33.1 (2015): 73. PubMed PMID: 25357182. PubMed Central PMCID: PMC4289409.

3. Rouet, Romain, et al. “Receptor-Mediated Delivery of CRISPR-Cas9 Endonuclease for Cell-Type-Specific Gene Editing.” Journal of the American Chemical Society 140.21 (2018): 6596-6603. PubMed PMID: 29668265. PubMed Central PMCID: PMC6002863.

4. Liang, Zhen, et al. “Efficient DNA-free genome editing of bread wheat using CRISPR/Cas9 ribonucleoprotein complexes.” Nature communications 8 (2017): 14261. PubMed PMID: 28098143. PubMed Central PMCID: PMC5253684.

5. Harrington, Lucas B., et al. “A thermostable Cas9 with increased lifetime in human plasma.” Nature Communications8.1 (2017): 1424. PubMed PMID: 29127284. PubMed Central PMCID: PMC5681539.

Additional resources on the Addgene Blog

Resources on Addgene.org

Источник: //blog.addgene.org/crispr-101-ribonucleoprotein-rnp-delivery

Нуклеопротеиды

рибонуклеопротеин (ribonucleoprotein, rnp)

Нуклеопротеиды (или нуклеопротеиды) — сложные белки, комплексы нуклеиновых кислот (ДНК или РНК) с белками. В зависимости от типа нуклеиновой кислоты делятся на дезоксирибонуклеопротеин и рибонуклеопротеины.

К нуклеопротеинов относятся устойчивые комплексы нуклеиновых кислот с белками, длительное время существуют в клетке в составе органелл или структурных элементов клетки в отличие от различных короткоживущих промежуточных комплексов белок -нуклеинова кислота (комплексы нуклеиновых кислот с ферментами -синтетазамы и гидролазами — при синтезе и деградации нуклеиновых кислот, комплексы нуклеиновых кислот с регуляторными белками и т.д.).

Структура и устойчивость

В зависимости от типа составляющих нуклеопротеидных комплексов нуклеиновых кислот различают рибонуклеопротеины и дезоксирибонуклеопротеины.

Устойчивость нуклеопротеидных комплексов обеспечивается ковалентным взаимодействием. В разных нуклеопротеидов для обеспечения стабильности комплекса вносят вклад различные типы взаимодействий, при этом нуклеиново-белковые взаимодействия могут быть специфическими и неспецифическими.

В случае специфического взаимодействия определенный участок белка связана со специфической (комплементарной) нуклеотидной последовательностью, в этом случае вклад водородных связей, образующихся между нуклеотидными и аминокислотными остатками благодаря пространственной взаимном соответствии фрагментов, максимален. В случае неспецифической взаимодействия основной вклад в стабильность комплекса вносит электростатическое взаимодействие отрицательно заряженных фосфатных групп полианион нуклеиновой кислоты с положительно заряженными аминокислотными остатками белка.

Примером специфического взаимодействия могут служить нуклеопротеидные комплексы рРНК — субъединицы рибосом; неспецифическая электростатическое взаимодействие характерно для хромосомных комплексов ДНК — хроматина с гистонами и комплексов ДНК-протамины головок сперматозоидов некоторых животных.

Нуклеопротеиды диссоциируют на белки и нуклеиновые кислоты при действии агентов, разрушающих или ослабляют Нековалентные связи:

  • повышенные концентрации солей или мочевины, увеличивающие ионную силу раствора
  • ионогенные поверхностно-активные вещества
  • некоторые полярные органические соединения (формамид и диметилформамид, фенол и т.д.).

Некоторые нуклеопротеиды (рибосомные субчастицы, нуклеокапсиды вирусов) обладают способностью самосборки, то есть формирования, при соответствующих условиях, нуклеопротеидов in vitro без участия клеточных структур или агентов; такое самосборки возможно в случае специфических нуклеиново-белковых взаимодействий (нуклеиново-белковом распознавании). В любом случае, при образовании нуклеопротеидов происходят существенные конформационные изменения нуклеиновых кислот и, в некоторых случаях, белков, образующих Нуклеопротеидные комплекс.

Распространенность и биологическая роль

Сильнейших конформационных изменений при образовании нуклеопротеидов испытывают нуклеиновые кислоты, и эти изменения существенные в случае образования дезоксирибонуклеопротеидив.

В отличие от одноцепочечной РНК, способной образовывать вторичные и третичные структуры за счет антипараллельных комплементарной спаривания смежных отрезков цепи, двухцепочечная ДНК такой возможности нет и существует в растворах в виде значительного более «рыхлых», по сравнению с компактными глобулами РНК, клубков.

Однако связывание ДНК с сильноосновные белками (гистонами и Протамина) за счет электростатического взаимодействия приводит к значительно плотнее упакованных нуклеопротеидных комплексов — хроматина, обеспечивает компактное хранение ДНК и, соответственно, наследственной информации в составе хромосом эукариот.

С другой стороны, большая конформационная подвижность РНК и ее каталитические свойства приводят к большому разнообразию рибонуклеопротеидив, выполняющих различные функции.

Дезоксирибонуклеопротеиды

  • Хроматин — комплекс ДНК с гистонами в клетках эукариот. За счет электростатического взаимодействия нить ДНК осуществляет двойной оборот вокруг октамера гистонного комплекса H2a, H2b, H3 и H4, образуя нуклеосомы, соединенные нитью ДНК. При присоединении к комплексу гистона H1 шесть нуклеосом образуют кольцеобразный комплекс, в результате происходит конденсация хроматина с образованием фибрилярнои структуры, далее при присоединении топоизомеразы II и ряда вспомогательных белков способна конденсироваться в гетерохроматин. ДНК, связанная в таком Нуклеопротеидные комплексе, а не транскрибуется.
  • Отдельным важным классом дезоксирибонуклеопротеидив являются вирусные нуклеопротеиды. Для репликации генетического материала ДНК-содержащих вирусов необходимо переноса вирусной ДНК в ядро клетки, такой транспорт и проникновение в ядро осуществляются в виде нуклеопротеидных комплексов, белки которых несут специфические участки — сигналы ядерной локализации (Nuclear Localization Signal, NLS), обеспечивающие транспорт через ядерные поры.

Рибонуклеопротеины

В клетках в наибольших количествах содержатся два класса рибонуклеопротеидив:

  • Нуклеопротеидные комплексы рибосомных РНП (рРНП) — субъединицы рибосом — органелл, на которых происходит трансляция мРНК. Рибосомы являются агрегатами из двух разных рРНП-субъединиц.
  • Малые ядерные рибонуклеопротеины (мяРНП) — нуклеопротеидные комплексы малых ядерных РНК, является субъединицами сплайсосом (участников сплайсинга ядерных транскриптов — предшественников зрелых мРНК).
  • Нуклеопротеидные комплексы мРНК — матричные рибонуклеопротеины (МРНП), также известные как информосомы. Биологическая роль МРНП весьма разнообразна: они вероятно участвуют в транспорте мРНК, стабилизации (защиты от деградации при транспорте) и регуляции трансляции. МРНП также химически разнообразным классом нуклеопротеидов и их разнообразие определяется транскриптомом, то есть совокупностью мРНК, синтезируемых в клетке.

Нуклеокапсиды вирусов

Нуклеокапсиды вирусов достаточно плотно упакованными комплексами белков с нуклеиновой кислотой (ДНК или РНК в ретровирусов) и как функционально, так и структурно близки к хроматина, будучи компактной формой вирусного генома.

Существует два основных типа нуклеокапсидных структур: палочковидная (нитевидная) или сферическая («изометрическая»).

В первом случае связанные белковые субъединицы периодически располагаются вдоль нити нуклеиновой кислоты таким образом, что она сворачивается в спираль, образуя своего рода «инвертированную нуклеосому», в которой, в отличие от нуклеосом эукариот, белковая часть расположена не внутри, а снаружи структуры.

Такая структура нуклеокапсидов типична для вирусов растений (в частности, вируса табачной мозаики) и миксо-, парамиксо- и рабдовирусов, нуклеокапсиды которых имеют спиральную форму.

В изометрических структурах упаковка нуклеиновой кислоты вирусного генома сложнее: белки оболочки нуклеокапсида относительно слабо связаны с нуклеиновой кислотой или нуклеопротеидами, что накладывает минимум ограничений на способ упаковки нуклеиновой кислоты. Нуклеопротеиды «сердцевины» при этом могут быть весьма сложно организованы: так, в паповавирусов двланцюжкова кольцевая ДНК, связываясь с гистонами, образует структуры, очень похожие на нуклеосомы.

Источник: //info-farm.ru/alphabet_index/n/nukleoproteidy.html

Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот

рибонуклеопротеин (ribonucleoprotein, rnp)

[13-063] Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот

3685 руб.

Специфичные аутоантитела к различным компонентам клеточного ядра, которые образуются при некоторых тяжелых аутоиммунных патологиях и имеют большое значение в диагностике системных ревматических заболеваний.

Синонимы русские

Специфичные АНА, антитела к экстрагируемым ядерным (нуклеарным) антигенам, антитела при аутоиммунных заболеваниях соединительной ткани.

Синонимы английские

Antinuclear Antibodies (ANA) Comprehensive Profile, ANA-specific Antibodies, Extractable Nuclear Antigen Antibodies (ENA Panel).

Метод исследования

Иммуноблотинг.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Антинуклеарные антитела (АНА) к экстрагируемым ядерным антигенам представляют собой антитела к растворимым компонентам ядра клетки (рибонуклеопротеинам). В норме АНА отсутствуют в организме. При аутоиммунной патологии иммунная система начинает вырабатывать специфические иммуноглобулины к собственным клеткам и их компонентам.

Основной метод определения специфичности антител при положительном антинуклеарном факторе – это иммуноблотинг, позволяющий дифференцировать системные заболевания соединительной ткани.  Данный метод исследования дает возможность одновременно выявить антитела к нескольким различным внутриклеточным антигенам, которые могут встречаться как сочетанно, так и изолированно.

Анти-Sm (Smith) – антитела к U1-, U2-, U4-рибонуклеопротеинам – специфичны для системной красной волчанки (СКВ). Они редко встречаются при других системных заболеваниях соединительной ткани и являются одним из критериев диагностики СКВ. При этом, однако, концентрация анти-Sm не коррелирует с активностью системной красной волчанки.

Антитела к антигенам RNP (anti-ribonucleoprotein) – это антитела к белковым компонентам малого ядерного нуклеотида – U-1-РНК. Они обнаруживаются при смешанных заболеваниях соединительной ткани (синдроме Шарпа), реже при системной красной волчанке и других ревматических заболеваниях.

Антитела к SS-A (Ro) направлены на белки, связанные с РНК Y1-Y5 в составе сплайсосомы. Эти антитела наиболее часто обнаруживаются при синдроме Шегрена и системной красной волчанке.

При СКВ их продукция ассоциируется с определенным набором клинических проявлений и лабораторных нарушений: светочувствительностью, синдромом Шегрена, гиперпродукцией ревматоидного фактора.

Присутствие анти-SS-A-антител в крови беременной женщины связано с высоким риском развития неонатального волчаночного синдрома у ребенка.

Анти-SS-B(La)-антитела к белку, связанному с РНК-полимеразой-3,  выявляются при болезни Шегрена и в начальном периоде системной красной волчанки, развивающейся в пожилом возрасте и ассоциирующейся с низкой частотой развития нефрита.

Антитела к Scl-70 (антисклеродермальные антитела с молекулярной массой 70 кДа, антитела к топоизомеразе I) чаще появляются при диффузной (40  %),  реже при ограниченной (20  %) форме системной склеродермии, CREST-синдроме. Они высокоспецифичны для склеродермии и являются плохим прогностическим признаком относительно развития легочного фиброза.

Антитела anti-PM/Scl – специфический серологический маркер для подгруппы больных склеродермией (Scl), полимиозитом (PM) и особенно для тех, у кого наблюдается совокупность симптомов обоих заболеваний (PM/Scl).

Антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA) – один из высокоспецифичных тестов для выявления системной красной волчанки.

Антицентромерные антитела (анти-CENT-B) обнаруживаются у больных склеродермией, системной красной волчанкой и ревматоидным артритом. У больных системной склеродермией выявление данных антител указывает на благоприятный прогноз и низкую вероятность поражения внутренних органов.

Анти-Jo-1-антитела (антитела к гистидин-тРНК-синтетазе) впервые были обнаружены в сыворотке крови больных миозитом. У большинства больных с повышенным уровнем антисинтетазных антител выявляется интерстициальная болезнь легких, феномен Рейно. Данное исследование может быть использовано как прогностический маркер прогрессирования болезни.

Антитела к гистонам представляют собой одну из разновидностей антинуклеарных антител и определяются в основном при системной красной волчанке, являясь ее ранними маркерами.

Антитела к нуклеосомам – чувствительный маркер системной красной волчанки. Они определяются исключительно при СКВ, нередко осложненной поражением почек (люпус-нефритом).

АТ к рибосомальному белку Р (Ribo P) встречаются у 10-20  % больных с СКВ. Они взаимодействуют с фосфоропротеинами рибосом и встречаются преимущественно у больных СКВ с поражением центральной нервной системы, почек и печени. Их обнаружение специфично для СКВ, протекающей с волчаночным психозом.

Анти-AMA-M2 – антитела к антигенам митохондрий М-2, расположенным на внутренней мембране органеллы в виде комплекса ферментов. Данные антитела синтезируются при первичном билиарном циррозе и указывают на его тяжелое течение.

Некоторые разновидности АНА встречаются при одном заболевании или при перекрестных синдромах. Например, антитела к SS-A и SS-B или к RNP и Sm-антигенам часто выявляются совместно, поскольку входят в один белковый комплекс, выступающий антигеном для данных типов аутоантител.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани;
  • для мониторинга течения и оценки прогрессирования ревматических заболеваний;
  • для дифференциальной диагностики некоторых аутоиммунных заболеваний.

Когда назначается исследование?

  • При выявлении антинуклеарного фактора и антинуклеарных антител в крови;
  • при симптомах аутоиммунных заболеваний (длительное повышение температуры тела, потеря массы тела, миалгии, артропатии, фоточувствительность, синдром Рейно (побледнение с последующим посинением и покраснением сосудов пальцев кистей и стоп), лейкопения и гемолитическая анемия);
  • при мониторинге течения системных заболеваний соединительной ткани.

Что означают результаты?

Референсные значения

Компонент

Референсные
значения

Антитела к дсДНК

не обнаружены

Антитела к Sm

не обнаружены

Антитела к митохондриям
(АМА-М2)

не обнаружены

Антитела к SS-B

не обнаружены

Антитела к SS-A (60 kДа)

не обнаружены

Антитела к SS-A (52 кДа)

не обнаружены

Антитела к Scl-70

не обнаружены

Антитела к RNP/Sm

не обнаружены

Антитела к рибосомам (Ribo
P)

не обнаружены

Антитела к PM-Scl

не обнаружены

Антитела к PCNA

не обнаружены

Антитела к нуклеосомам

не обнаружены

Антитела к Jo-1

не обнаружены

Антитела к гистонам

не обнаружены

Антитела к CENP-B

не обнаружены

Варианты результата: – пограничный результат (+/-); – низкое содержание аутоантител к специфическому антигену (1+); – среднее содержание аутоантител к; специфическому антигену (2+) – высокое содержание аутоантител к

специфическому антигену (3+).

Причины повышения специфичных АНА

анти-Sm

  • Системная красная волчанка (у 10-40  % пациентов)
  • Смешанное заболевание соединительной ткани (редко)
  • Синдром Шегрена (редко)

Анти-RNP

  • Смешанное заболевание соединительной ткани (95-100  %)
  • СКВ (25-50  %)
  • Склеродермия (30  %)
  • Синдром Шегрена (15 %)
  • Ревматоидный артрит (10  %)

Анти-SS-A (Ro)

  • СКВ (15-35  %)
  • Неонатальный волчаночноподобный синдром (100  %)
  • Склеродермия (60  %)
  • Ревматоидный артрит (10  %)
  • Синдром Шегрена (40-75  %)
  • Смешанное заболевание соединительной ткани (менее 5  %)

Анти-SS-B (La)

  • Синдром Шегрена (15-60  %)
  • СКВ (10-15  %)
  • Склеродермия (25  %)
  • Ревматоидный артрит (5  %)

Анти-Scl-70

  • Склеродермия, диффузная форма (20-60  %) в сочетании с легочным фиброзом
  • CREST-синдром
  • Изолированный синдром Рейно с последующим развитием склеродермии

Анти-PM-Scl

Анти-PCNA

  • Волчаночный нефрит (люпус-нефрит)

Анти-CENT-B

  • Склеродермия (70  %)
  • CREST-синдром

Анти-Jo-1

  • Полимиозит, дерматомиозит (антитела выявляются у половины больных) в сочетании с легочным фиброзом

Антитела к гистонам

  • СКВ
  • Склеродермия
  • Лекарственная волчанка

Антитела к нуклеосомам

Анти-Ribo P

  • СКВ, ассоциированная с люпоидным церебритом (волчаночным психозом)

Анти-AMA-M2

Что может влиять на результат?

  • Лекарственные препараты, способные повышать уровень Scl-70: аминосалициловая кислота, изониазид, метилдопа, пенициллин, пропилтиоурацил, стрептомицин, тетрациклин.
  • Антитела к гистонам могут появляться при лекарственной волчанке, вызванной приемом гидралазина, прокаинамида, хинидина.

Важные замечания

  • Результаты данного исследования должны интерпретироваться только комплексно, в сочетании с клиническими данными. Системное аутоиммунное заболевание при отсутствии клинической картины не может быть диагностировано только на основании выявления специфичных антинуклеарных антител.
  • Отрицательный  результат иммуноблота не исключает системного аутоиммунного заболевания соединительной ткани.

Также рекомендуется

  • Антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках
  • Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), IgG
  • Антитела к кардиолипину, IgG и IgM
  • Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
  • Иммуноблот при полимиозите (Мi2b, Ku, Pm-Scl100, PM-Scl75, Jo-1, SRP, PL-7, PL-12 EJ, OJ, Ro-52)
  • Диагностика системной красной волчанки
  • Скрининг болезней соединительной ткани
  • Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
  • Лейкоцитарная формула
  • Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Кто назначает исследование?

Ревматолог.

Литература

  • Назаренко Г. И., Кишкун А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. – М.: Медицина, 2000. – 533 с.
  • Fischbach F.T., Dunning M.B. A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests, 8th Ed. Lippincott Williams & Wilkins, 2008: 1344 p.
  • Wilson D. McGraw-Hill Manual of Laboratory and Diagnostic Tests 1st Ed.  Normal, Illinois, 2007: 666 p.
  • Sabatine. M. Pocket Medicine. 3d ed. USA, Philadelphia: LWW; 2008.

Источник: //helix.ru/kb/item/13-063

Ваш Недуг
Добавить комментарий