Реакция нейтрализации токсина

Реакция нейтрализации токсина анатоксином. Компоненты. Методы постановки. Практическое применение

Реакция нейтрализации токсина

Р-я нейтрализации экзотоксина происходит при его взаимодействии с антитоксической сывороткой (антитела-антитоксины). В результате образовании комплекса АГ-АТ – токсин теряет свои ядовитые свойства. Р-ю нейтрализации проводят с целью обнаружения и титрования токсинов, анатоксинов или антитоксинов.

Токсины получают путем фильтрования жидкой пит. среды или исследуемого материала, где размножались токсигенные бактерии. При обработке формалином в течение 30-45 дней при t 37°С токсин превращается в анатоксин, который используют для иммунизации животных с целью получения антитоксической сыворотки.

Варианты постановки реакции нейтрализации токсина: Реакция флоккуляции основана на способности токсина или анатоксина при смешивании в эквивалентных соотношениях с антитоксической сывороткой образовывать помутнение в пробирке. Используют для количественного определения токсинов или анатоксинов.

Реакция нейтрализации in vivo. Для определения типа токсина его смешивают с диагностической антитоксической сывороткой и эту смесь вводят белым мышам. При нейтрализации токсина антитоксической сывороткой мыши не погибают.

Реакцию нейтрализации используют для определения антитоксического иммунитета у детей при дифтерии (проба Шика) и скарлатине (проба Дика). Для этого в область предплечья внутрикожно вводят определенное количество соответствующего токсина. При наличии в организме антитоксинов произойдет нейтрализация токсина и р-я будет отрицательной.

При отсутствии антитоксинов в организме возникает воспалит. р- я на месте введения токсина. Р-я нейтрализации вирусов-используется для идентификации вирусов. Для этого к исследуемому материалу, содержащему неизвестный вирус, добавляют специфическую противовирусную сыворотку.

После инкубации эту смесь вводят либо в куриный эмбрион, либо лабораторному животному, либо в культуру клеток. Наиболее распространена р-я нейтрализации вирусов в культуре клеток. Здесь в культуральную среду добавляется индикатор. Если АТ соответствуют вирусу (нейтрализуют его), то клеточная культура развивается нормально.

При этом происходит выделение кислых продуктов клеточного метаболизма, рН среды снижается, и индикатор изменяет свой цвет. В контроле вирус быстро разрушает клеточную культуру, рН не меняется, и цвет среды остается прежним. На этом же принципе основана р-я ингибиции метаболизма для идентификации миксоплазм.

РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА ПРИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЯХ.РЕАКЦИЯ ТОРМОЖЕНИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ,РЕАКЦИЯ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ.КОМПОНЕНТЫ.ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ.

РТГА-эту реакцию ставят при диагностике заболеваний возбудители кот. Обладают гемагглютинирующими свойствами(грипп, парагрипп).

ИНГРЕДИЕНТЫ , ПОСТАНОВКА.

Реакцию ставят в 2 этапа.

1.к предварительно раститрованной сыворотке больного в лунки планшета добавляют вирусный диагностикум, инкубируют.

2. добавляют в лунки куриные эритроциты (парагрипп,эритроциты морской свинки)инкубируют проводят учет

УЧЕТ. 1.ВЕРХНИЙ РЯД ЛУНОК

А) ПУГОВКИ(осадок эритроцитов с ровными краями, занимающие 1/3дна лунки)выявлены при разведениях 1/10 – 1/120

Б) ЗОНТИКИ(осадок эритроцитов с неровными краями занимающие 2/3 дна лунки)выявлены при разведениях 1/40 – 1/320

2. А) ПУГОВКИ выявлены при разведениях 1/10 – 11/80

Б) ЗОНТИКИ выявлены при разведениях 1/160 – 1/320

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

А) на наличие антител указывает ПУГОВКА

Б) на отсутствие антител указывает ЗОНТИК

В) на титр антител указывает наиболее разведенные сыворотки, при кот. Выявляют антитела

Вывод. А)Титр антител на 7-й день = ½;Б На 14-й день=1/80; В)диагноз грипп А подтв.т.к титр увеличился в 4раза

РЕАКЦИЯ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ

Эту реакцию ставят при диагностике заболеваний возбудители которых обладают цпд(цитопатическим действием)например полиомиелит.

Реакцию ставят в 2 этапа.

1.к раститрованой пробирке сыворотки 1/2- 1/4 – 1/8 и т.д. добавляют вирусный диагностикум, инкубируют.

2.в пробирки добавляют взвесь культуры культуры клеток в питательной среде(199)вазелин. Масло, инкубируют проводят учет

УЧЕТ

1-й ряд пробирок сыворотка на 7-й день заболевания

А) желт. Жидкость выявлена при разведениях 1/2 – ¼ – 1/8 – 1/16

Б) розовая жидкость выявлена при разведениях 1/32 – 1/64

2-й ряд сыворотка через 14 дн. от начала заболевания

А)желт. Жидкость выявлена при разведениях 1/2 – 1/4 – 1/8 – 1/16

Б)розов. Жидкость выявлена при разведениях 1/32 – 1/64

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

А. НА НАЛИЧИЕ АНТИТЕЛ УКАЗЫВАЕТ ЖЕЛТ. ЖИДКОСТЬ

Б. НА ОТСУТСТВИЕ АНТИТЕЛ УКАЗЫВАЕТ РОЗОВАЯ ЖИДКОСТЬ

В. На титр антител указывает наиболее разведенные сыворотки, при которых выявляют антитела

ВЫВОД.а) титр антител на 7й день заболевания=1/16

Б) титр на 14-й день=1/16

Т.к титр антител не изменился диагноз полиомиелит пациенту не подтаерждаем.

Необходимо провести диф диагностику от др. энтеровирусных заболеваний.

64. Реакции имунофлюорестенции, компоненты, практическое применение.«Флуоресцирующие антитела» представляют собой специфические иммуноглобулины, «помеченные» красителем типа флуоресцеина или родамина, флуоресцирующим при облучении ультрафиолетовым или синим светом.Прямая иммунофлуоресценция (А—аф).

Вирусный антиген (А) (в виде, например, фиксированного ацетоном зараженного вирусом монослоя клеток на покровном стекле) обрабатывают конъюгированной с флуоресцеином антивирусной сывороткой {аф).

Избыток ар отмывают и клетки просматривают с помощью микроскопа, снабженного сильным источником света (лампа с парами ксенона или ртути) и фильтром, задерживающим лучи всех длин волн, кроме коротковолновых.

Между объективом и окуляром вводят дополнительные фильтры, которые поглощают все синие и ультрафиолетовые лучи; таким образом, препарат выглядит черным, за исключением тех мест, где флуоресцеин излучает зелено-желтый свет. Непрямая иммунофлуоресценция (А—а—гф).

Для этого метода, иногда называемого методом «сэндвича», характерно то, что антивирусные антитела (а), не меченные красителем, выполняют роль «начинки в сэндвиче». Они связываются как с антигеном (А), так и с антигаммаглобулином, конъюгированным с флуоресцеином (гф), который добавляют в конце реакции.

Например, если в качестве антивирусной сыворотки берут сыворотку человека в период выздоровления, то целесообразно использовать глобулин (г), полученный путем иммунизации коз или кроликов нормальным человеческим глобулином.

Непрямой метод иммунофлуоресценции более чувствителен, чем прямой, и, что особенно важно в диагностике, для тестирования взаимодействия любого антигена с соответствующими антителами, образующимися в организме человека, необходим лишь один вид меченого реагента, например конъюгированный с флуоресцеином козий у-глобулин против глобулина человека. Иммунофлуоресценция комплемента (А—а—К—гф). После того как комплекс антиген—антитело свяжет комплемент, в систему вносят конъгогированнкй с флуоресцеином иммуноглобулин против комплемента. Метод сопряжен с рядом трудностей и используется не так широко, как описанные выше варианты.Иммунофлуоресценция обладает двумя основными преимуществами по сравнению с другими серологическими методами. В исследовательской работе этот метод позволяет определить, какие клетки в органе содержат вирус, и установить локализацию специфических вирусных антигенов в зараженной клетке. Несмотря на то что трудности, обусловленные неспецифической флуоресценцией, несколько задерживают широкое внедрение метода в диагностических лабораториях, он имеет большие возможности для ускоренной идентификации вируса как непосредственно в материале, полученном при биопсии или аутопсии, так и после пассирования вируса в культуре клеток.

Чаще всего РИФ используют для быстрого обнаружения возбудителя в патологическом материале.

Учет результатов реакции осуществляется с помощью люминесцентного микроскопа, в оптическую систему которого устанавливается набор светофильтров, обеспечивающих освещение препарата ультрафиолетовым или сине-фиолетовым светом с заданной длинной волны.

Это заставляет флюорохром светиться в заданном диапазоне спектра. Исследователь оценивает характер свечения, форму, размер объектов и их взаимное расположение.

ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ(ИФА).ИММУНОБЛОТИНГ(ИБ).КОМПОНЕНТЫ ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ. ИФА.

ИНГРЕДИЕНТЫ, ПОСТАНОВКА

на фарм предприятии на дно лунок планшета адсорбируют австралийский антиген(Hbs антиген)

В лаборатории/станции переливания крови в лунки наливают контрольные сыворотки и сыворотки пациентов(7- чел).инкубируют, промывают и доб-т античеловеческую сыворотку, конъюгированную с ферментом(пероксидаза).инкубируют промывают и добавляют реактив на фермент (5- аминосалициловая кислота(р-р + перекись Н 3%)инкубируют проводят учет

УЧЕТ

1)контрольные лунки

А)заведомо положительная сыворотка(А11)- выявлена коричневая жидкость

Б)заведомо отрицательная сыворотка(А12)- выявлена желт. Жидкость

В)исследуемые сыворотки.(желт. Жидкость выявлена в лунках А3,А4,А6)

г) коричневая жидкость в лунках,(А1,А2,А5,А7)

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

1)На наличие антител к Hbs антигену указывает коричневая жидкость

2)на отсутствие антител указывает желт.

ВЫВОД. У пациентов А1, А2, А5, А7 выявлены антитела к Hbs антигену.

ИММУНОБЛОТИНГ

1.ИНГРЕДИЕНТЫ(полоски из нитроциллюлозы на кот. Путем электрофореза разделены антигены ВИЧ1 и ВИЧ2)контейнеры/ванны, исследуемые сыворотки пациентов, заведомо положительная сыворотка к ВИЧ1, заведомо положительная сыворотка к ВИ2,конъюгат античеловеческой сыворотки,реактив на фермент.

2.ПОСТАНОВКА предварительно в контейнерах инкубируют сыворотки со стрипами, затем промывают стрипы и добавляют конъюгат, вновь инкубируют и после промывки добавляют реактив, инкубируют проводят учет

УЧЕТ

1)КОНТРОЛЬНЫЕ СТРИПЫ

А)контроль отсутст-е поставле-й иб(№22) коричневой линии на полоске не выявлено

Б)заведомо положительная сыворотка к ВИЧ1(№23)выявлено 3 коричневы линии сверху различной окраски

Г)заведомо положительная сыворотка к ВИЧ2(№24)выявлено 2 коричневые линии в центральной части стрипа

2)ИССЛЕДУЕМЫЕ СЫВОРОТКИ(№1 – №21)

А) в нижней части всех стрипов выявлены коричн. Линии в кол- ве 1-й линии

Б)светло- коричневая линия выявлена в центральной части стрипа№5

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

1)НА ПРОИЗОШЕДШУЮ РЕАКЦИЮ ИБ УКАЗЫВАЮТ

– коричн. Линия в нижней части стрипа

2)на выявление антител к ВИЧ1 указывает 3 коричневые линии в верхней части стрипа

3)на выявление антите к ВИЧ2 указывают 2 коричневые линии в центральной части стрипа

5.ВЫВОД.выявлены врачебные ошибки

А) сомнительный результат был подтвержден пациенту № (это не верно т.к ?

Б)пациента №6 обязаны были отправить на дополн. Обследование(а о пациенте №5 забыли)

Источник: //cyberpedia.su/13x17fb8.html

Реакция нейтрализации токсина антитоксином. Механизм. Способы постановки, применение

Реакция нейтрализации токсина

В основе этой реакции лежит способность специфической антитоксической сыворотки нейтрализовать экзотоксин.

Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией.

Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген–антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы).

При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген–антитело.

Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свинкам, мышам).

Контрольным животным вводят фильтрат исследуемого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сывороткой, животные опытной группы останутся живыми.

Контрольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.

Иммунофлюоресцентный метод (РИФ, реакция иммунофлюоресценции, реакция Кунса) – метод выявления специфических Аг с помощью Ат, конъюгированных с флюорохромом. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью.

Применяется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний (идентификация возбудителя в исследуемом материале), а также для определения Ат и поверхностных рецепторов и маркеров лейкоцитов (иммунофенотипирование) и др. клеток.

Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфекционных материалах, тканях животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое применение в диагностической практике.

Приготовление флюоресцирующих сывороток основано на способности некоторых флюорохромов (например, изотиоцианата флюоресцеина) вступать в химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их иммунологической специфичности.

Различают три разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом.

Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа.

Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.

Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген – антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки.

Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом.

Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.

Механизм. На предметном стекле готовят мазок из исследуемого материала, фиксируют на пламени и обрабатывают иммунной кроличьей сывороткой, содержащей антитела против антигенов возбудителя.

Для образования комплекса антиген — антитело препарат помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С в течение 15 мин, после чего тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия для удаления не связавшихся с антигеном антител.

Затем на препарат наносят флюоресцирующую антиглобулиновую сыворотку против глобулинов кролика, выдерживают в течение 15 мин при 37 °С, а затем препарат тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия.

В результате связывания флюоресцирующей антиглобулиновой сыворотки с фиксированными на антигене специфическими анти телами образуются светящиеся комплексы антиген — антитело, которые обнаруживаются при люминесцентной микроскопии.

Page 3

Иммуноферментный анализ или метод — выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой).

После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.

ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др.

, а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях (1010-1012 г/л).

Твердофазный ИФА— вариант теста, когда один из компонентов иммунной реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола.

Компоненты выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена.

Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем промывания,

I. При определении антител (левый рисунок) в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента.

II. При определении антигена (правый рисунок) в лунки с сорбированными антителами вносят антиген (напр., сыворотку крови с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыворотку против него и вторичные антитела (против диагностической сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хромоген для фермента.

Конкурентный ИФАдля определения антигенов: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки.

Другой тест – Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченные ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.

Иммуноблоттинг — высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Иммуноблоттинг используют как диагностический метод при ВИЧ-инфекции и др.

Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на активированную бумагуили нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного.

Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом.

Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.

Источник: //vuzlit.ru/1156683/reaktsiya_neytralizatsii_toksina_antitoksinom_mehanizm_sposoby_postanovki_primenenie

Реакции нейтрализации токсина антитоксином

Реакция нейтрализации токсина

При диагностике некоторых инфекционныхзаболеваний, возбудители которыхпродуцируют экзотоксины, используютреакцию нейтрализации токсинаантитоксином.

Для ее проведенияисследуемый материал, в которомподозревают наличие токсина, смешиваютс соответствующей антитоксическойсывороткой и после инкубации в термостатевводят лабораторным животным (белыемыши, морские свинки). Контрольнымживотным вводят только исследуемыйматериал.

Если взятая в опыт антитоксическаясыворотка нейтрализует токсин, животныеостанутся живы. Контрольные животныегибнут под действием токсина. Реакциянейтрализации используется для выявлениятоксинов возбудителей ботулизма,столбняка, газовой гангрены.

Часто для определения активностииммунных антитоксических сыворотоканатоксинов используется реакциянейтрализации по механизму флоккуляции.

Реакция флоккуляции

В результате взаимодействия токсинаили анатоксина с антитоксическойсывороткой выпадают хлопья флоккулята.Наиболее интенсивная и ранняя(«инициальная») флоккуляция происходитв пробирке, где антиген и антителосодержатся в эквивалентных соотношениях.

Реакцию ставят в два этапа.

1. По стандартной сыворотке устанавливаютLf(Limesflocculationis) в 1 мл токсина.Lfтоксина определяетсяего количеством, которое дает «инициальную»флоккуляцию с международной единицей(МЕ) сыворотки. Установив силу токсина,приступают к определению силы сыворотки.

2. Известной силы токсин и испытуемуюантитоксическую сыворотку разливаютв пробирки в определенном объеме.Пробирки выдерживают на водяной банепри 45ºС в течение 30 мин до выпаденияхлопьев в одной из них.

«Инициальная» флоккуляцияпроявляетсяв той пробирке, где количество токсинасоответствует количеству международныхединиц сыворотки. Например, еслифлоккуляция произошла в 3-й пробирке,значит в 0,4 мл сыворотки находится 40МЕ.Следовательно, 1 мл сыворотки содержит40:0,4=100 МЕ.

Ингридиенты, млпробирки
1234567
Токсин, содержащий 20 Lf в 1 мл0,20,20,20,20,20,20,2
Исследуемая сыворотка0,20,30,40,50,60,6
Инкубация при 45ºС в течение 30 мин
Результаты по «инициальной» флоккуляции

Аллергия.

Аллергия(от греч.allos- другой) – специфическаяповышеннаячувствительность к антигенам(аллергенам) в результате неадекватнойреакции иммунной системы.

Аллергические реакции различаются повремени их появления после повторногоконтакта с аллергеном:

1) реакции гиперчувствительностинемедленного типа (ГЧНТ) – развиваютсячерез несколько минут

2)реакции гиперчувствительностизамедленного типа (ГЧЗТ) – развиваютсячерез 6-10 ч и позднее.

По классификации Джелла и Кумбсавсе аллергические реакции в зависимостиот механизмов развития разделяют на 4типа.

Реакции гиперчувствительности Iтипа – анафилактический тип –обусловлены взаимодействием аллергенаиIgE, сорбированным намембранах тучных клеток и базофилов,что приводит высвобождению БАВ (гистамин,серотонин, эозинофильный и нейтрофильныйхемотаксические факторы, протеазы). Этимедиаторы взаимодействуют с рецепторамимышечных клеток, секреторных и многихдругих клеток, что приводит к сокращениюгладкой мускулатуры (напр., бронхов),повышению проницаемости сосудов иотеку.

Клинически реакции первого типапроявляются анафилаксией (системныереакции) и атопическими заболеваниями(местные реакции), реже острой крапивницейи ангионевротическим отеком. Главныеформы: риниты, конъюнктивиты, бронхиальнаяастма, отек Квинке.

Анафилактические реакции специфичныи развиваются после попадания аллергена,к которому организм был предварительносенсибилизирован. После первичногоконтакта с аллергеном такое состояниеформируется через 7-14 сут. и сохраняетсягодами.

РеакциигиперчувствительностиIIтипа – цитоксический тип. Образующиесяантитела (обычноIgGилиIgM) связывают чужеродныеантигены, фиксированные на клеткахиндивидуума. Формирование иммунныхкомплексов на поверхности активируетсистему комплемента, что ведет кформированию МАК и стимулируетфагоцитарные реакции.

Клинически проявляются поражениямикрови (иммунные цитопении), поражениилегких и почек при синдроме Гудпасчера,острыми отторжениями транстплантантов,гемолитической болезнью новорожденных.

Реакциигиперчувствительности IIIтипа – иммунокомплексный тип.Данные реакции обусловлены образованиемиммунных комплексов, фиксирующихся втканях и вызывающих их повреждение. Внорме такие комплексы Аг-Ат элиминируютсяфагоцитами.

Иногда при высокихконцентрациях иммунных комплексов онизадерживаются в тканях (часто не имеющихотношения к источнику антигена) изапускают местные и системныевоспалительные реакции. Связывая иактивируя компоненты системы комплемента,они привлекают фагоциты.

Последние неспособны поглощать такие большиеструктуры и выделяют протеолитическиеферменты и другие медиаторы воспаления,повреждающие ткани, в которых фиксированкомплекс.

Клинические примеры: сывороточнаяболезнь, экзогенный аллергическийальвеолит (комплексы фиксируются влегочных капиллярах), системная краснаяволчанка, ревматоидный артрит (комплексыфиксируются в синовиальных оболочкахсуставов), васкулиты (комплексы фиксируютсяв эндотелии кровеносных сосудов),гломерулонефрит (комплексы фиксируютсяв фильтрующем аппарате почек).

Реакции гиперчувствительности IVтипа –гиперчувствительность замедленноготипа.Обусловлена клеточнымииммунными реакциями. Развиваются неранее чем через 24-48ч после повторноговведения антигена. Развитие ГЧЗТиндуцируют продукты микроорганизмов,гельминтов, природные и искусственныеантигены и гаптены (лекарства, косметика).

Классические примеры – туберкулиноваяпроба и контактный дерматит.

Распознавание антигена связанного сбелками организма, иммунокомпетентнымиклетками вызывает активацию Т-хелперов,что приводит к пролиферации Т-киллеровГЧЗТ. Сенсибилизированные Т-киллерысекретируют цитокины, привлекают другиелимфоциты и макрофаги в очаг. На болеепоздних этапах в реакцию включаютсяполиморфно-ядерные фагоциты, стимулирующиевоспалительный ответ.

Гаптены приобретают способностьинициировать реакции ГЧЗТ послевзаимодействия с белками. Белки жевызывают ГЧЗТ при длительной иммунизациималыми дозами в сочетании с адъювантами.

Многие низкомолекулярные органическиеи неорганические вещества (напр., хром),связываясь с белками кожи, выполняютроль гаптенов и сенсибилизируют организмпри длительном контакте.

В результатеразвивается контактный дерматит.

Способность отвечать развитием ГЧЗТна различные микробные продукты (напр.,антигены возбудителей туберкулеза,бруцеллеза) применяют при постановкепроб для диагностики инфекционногопроцесса или установления возможногоконтакта организма с возбудителем.

Источник: //studfile.net/preview/4664339/page:3/

ПОИСК

Реакция нейтрализации токсина
    Нейтрализация токсина антитоксином позволяет определить наличие в исследуемом материале токсина и его типовую принадлежность, что очень важно для назначения специфического лечения. Для постановки реакции нейтрализации необходимы  [c.

259]

    Обнаружение ботулинического токсина. Обнаружение токсина и определение его типа с помощью реакции нейтрализации имеет особое значение для выбора антитоксической сыворотки — единственного средства специфической терапии и экстренной профилактики ботулизма.

[c.196]

    Реакция нейтрализации токсина [c.83]

    Если в исследуемом материале имеется ботулинический токсин, выживает только одна пара мышей вследствие нейтрализации токсина антитоксической сывороткой соответствующего типа (положительная реакция). Если же погибнут все мыши, то PH следует повторить, предварительно разбавив биоматериал в 5, 10, 20 или 100 раз.

При наличии в исследуемом материале ботулинического токсина у мышей развивается парез конечностей. На вскрытии трупов мышей обнаруживают гиперемию внутренних органов, очаги воспаления в легких, переполнение желудка, мочевого и желчного пузырей.

В заключении лаборатории об обнаружении в исследуемом материале ботулинического токсина обязательно указывают его тип. [c.197]

    Реакция нейтрализации токсина антитоксином в агаровом геле [c.97]

    Методика реакции. Для проведения PH используют сухие диагностические антитоксические сыворотки типов А, В, Е, F, которые разводят ИХН до 100 — 200 МЕ/мл, что обычно обеспечивает нейтрализацию гомологичного токсина в исследуемой пробе.

Реакцию нейтрализации проводят либо со смесью сывороток (предварительная реакция), либо с моновалентными сыворотками — для обнаружения токсина определенного типа.

Подготовленный исследуемый материал (кровь, фильтрат, центрифугат) разливают по 1 мл в 5 пробирок в первые четыре пробирки добавляют по 1 мл противоботулинической сыворотки типов А, Б, Е, соответственно, в последнюю — 1 мл нормальной сыворотки.

Пробирки инкубируют при 37 °С в течение 30 мин, затем по 0,5—1,0 мл смеси из каждой пробирки вводят пяти парам белых мышей массой 16—18 г (кровь — внутрибрюшинно, другие биоматериалы — подкожно). Наблюдают за животными в течение 4 сут. [c.197]

    Определить силу антитоксической сыворотки по известному токсину с помощью реакции нейтрализации токсина антитоксином (реакция флоккуляции). [c.123]

    Микробиологическая диагностика. Исследуют промывные воды желудка, рвотные массы, остатки пищи. Применяют бактериологический метод, направленный на обнаружение возбудителя, биологический метод (реакцию нейтрализации токсина антитоксином in vivo) и серологический метод (РНГА), позволяющие выявить в исследуемом материале ботулинический токсин. [c.219]

    Биологическая проба и реакция нейтрализации токсина. Для постановки биологической пробы используют материал, полученный у больного, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь, материал от трупа и пищевые продукты, подозреваемые как причина отравления. [c.258]

    Обычным титрованием определяют конечную точку, которая зависит как от количества, так и от качества реагентов. Реакцию, лежащую в основе титрования, можно свести к реакции практически нулевого порядка, работая при большом избытке одного из компонентов, и тогда количество другого компонента может быть оценено независимо. Но в таких системах нельзя определить качество реагентов, поскольку оно либо проявляется только вместе с количеством, либо совсем не оказывает влияния. Это справедливо и для бинарных реакций (таких, как реакция преципитации в растворе или в геле, активная или пассивная агглютинация, связывание комплемента и т. п.), и для тройных систем, где акцептор и индикатор конкурируют за третий компонент (например, при ингибировании любой бинарной реакции, нейтрализации токсинов или живых патогенных организмов и т. д.). [c.11]

    Для выявления ботулинического токсина исследуемые пробы консервов фильтруют и с фильтратом ставят реакцию нейтрализации токсина антитоксической противоботулинической сывороткой типов А, В, С, Е, F на белых мьш1ах. В консервах не допускается присутствие С1. botulinum и его токсина, С1. perfringens и других патогенных бактерий. [c.95]

    У выделенных культур (реже непосредственно в исследуемом материале) определяют характерные для возбудителя токсины (цитотоксин, энтеротоксин).

Для этого используют тесты нейтрализации на культуре ткани и ИФА (последний также используют для скрининга токсигенных культур).

Для быстрого обнаружения возбудителя в исследуемом материале применяют реакцию агглютинации латексных частиц, нагруженных антителами к С. diffi ile. Ввиду широкого распространения данных микроорганизмов у здо- [c.195]

    J При этом П.

Эрлих представлял, что кЛетка якобы может иметь антитела трех порядков антитела первого порядка, обусловливающие нейтрализацию токсина, имеют одну группу связывания, которая соединяется с гаптеном антигена антитела второго порядка, вызывающие реакции агглютинации и преципитации, обладают группой связывания и эффекторной группой склеивания или осаждения антигенов антитела третьего порядка, связывающие комплемент, содержат две группы связывания, одна вступает в реакцию с антигеном, а другая — с комплементом. [c.49]

    Окончательную идентификацию выделенных клостридий газовой гангрены проводят путем выявления и типирования их экзотоксинов. Для этого ставят реакцию нейтрализации с поливалентными и моновалентными сыворотками (к токсинам С. perfringens, С. septi um, С. novyi А vi В).

Центрифугаты 3-дневных бульонных чистых культур, содержащие экзотоксины, смешивают с соответствующими сыворотками и после 30-минутной экспозиции при 37 С по 0,5 мл смеси внутрибрюшинно вводят лабораторными животным (мышам). Результат учитывают через 5 ч и окончательно — на 3 —4-е сут.

В случае нейтрализации (положительный результат) животные выживают, в контроле и при отрицательном результате (несоответствие сыворотки типу токсина) — погибают (обычно через I—4 ч). [c.192]

    Вопрос о механизме реакции антител с антигенами еще не получил полного разрешения. Несомненна, однако, существенная роль в этом процессе ионных, водородных и ван-дер-ваальсовых связей. Реакция эта, по крайней мере, двухстадийна. Первая стадия протекает очень быстро и не сопровождается видимыми изменениями.

Она характеризуется довольно существенным тепловым эффектом ДЯ от 2 до 40 ккал/моль. Вторая стадия взаимодействия антигена с антителом длится часами.

В различных системах она может протекать по-разному, сопровождаясь преципитацией (выпадением образовавшегося комплекса в осадок), агглютинацией (слипанием антигенных частичек), лизисом (растворением клеток), нейтрализацией токсинов и вирусов и т. п. [c.112]

    Вследствие того что токсины разных видов клостридий < личаются по своим антигенным свойствам, их серологическ] идентификацию проводят в реакции нейтрализации на лабо1 торных животных.

С этой целью смесь исследуемого токси с антитоксической сывороткой (С1. perfringens или С1. nov вводят подкожно морской свинке.

В случае нейтрализации токе на животное остается живым при отрицательной реакции мс ская свинка погибает через 30 мин—4 ч после инъекции. [c.148]

    Антитоксическая сыворотка I. perfringens. Применяете с диагностической целью в реакции нейтрализации исследуе мого токсина на белых мышах. [c.198]

    Реакция нейтрализации (PH). Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки ткани. Это связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией.

При постановке реакции смесь антиген — антитело, полученную in vitro, вводят животным или вносят в культуру клеток.

При отсутствии повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов и токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, специфичности взаимодействия комплекса антиген — антитело. [c.179]

    К диагностическим сывороткам относятся 1) агглютинирующие сыворотки, применяемые для определения рода, вида и с ювара бактерий 2) преципитирующие сыворотки, предназначенные для выявления антигенов в иссле емом материале 3) Гемолитическая сыворотка, используемая в реакции связывания комплемента 4) антитоксические сыворотки, нейтрализу- ющие токсины 5) антивирусные сыворотки, употребляемые для типирования вирусов в реакциях нейтрализации. Торможения гемагглюгинации и тормо- жения г ладсорбции.  [c.89]

Источник: //www.chem21.info/info/1573419/

63 – микробиология экзамен

Реакция нейтрализации токсина

61.   Реакциинейтрализации. Механизм, компоненты, способы постановки, применение. Реакциянейтрализации токсина антитоксином.

Реакциянейтрализации

Антитела иммуннойсыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие мик­робов или ихтоксинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микро­бныхантигенов антителами, т. е. их нейтрали­зацией.

Реакцию нейтрализации(РН) проводят путем введения смеси антиген—антитело жи­вотным или вчувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы).

При отсутствии уживотных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или ихантигенов, токсинов говорят о нейтрализующем дейс­твии иммунной сыворотки и,следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген—антитело

Реакция нейтрализации основанана способности специфических вируснейтрализующих антител блокироватьинфекционные, гемагглютинирующие, гемадсорбирующие, цитопатические,бляшкообразующие и др. свойства вирусов.

Она применяется в двухнаправлениях:1) для идентификации вирусов;2) для серодиагностики вирусных инфекций, т.е. для определения нарастания титравируснейтрализующих антител в «парных» сыворотках.Компоненты:1.

Исследуемый вирус (при идентификации выделенною вируса) или исследуемаясыворотка (при серодиагностике инфекции).2. Диагностическая (группе-, видо-, типоспецифическая) сыворотка (приидентификации вируса) или известный вирус — диагностикум (при серодиагностике).

3.

Индикаторный объект: животные, куриные эмбрионы, культуры тканей илиэритроциты.

Реакции нейтрализации т У!УОставят в культурах клеток, куриных эмбрионах и на лабораторных животных.

Принцип. Смесью вирус (исследуемый или известный)+ сыворотка (диагностическая или исследуемая), выдержанной в течениеопределенного времени, заражают культуру клеток, куриный эмбрион илилабораторное животное. При (+} реакции, т.е. при нейтрализации вирусаантителами индикаторные объекты продолжают нормально существовать, а в контроле— гибель или характерные изменения.

Реакция нейтрализации — реакцияторможения гемагглютинации (РТГА).

РТГА применяется:-для серотипирования вирусов;-для серодиагностики инфекций.Выделяют два способа постановки:- капельный способ на стекле (ориентировочная реакция), применяется для серокопирования вирусов;

– развернутый в пробирках.

Механизм. У некоторых вирусов (например, гриппа)есть гемагглютинин, вызывающий агглютинацию эритроцитов различных животных, взависимости от вида вируса. При наличии в сыворотке антител —антигемагглютининов наблюдаются инги-бирования активности вирусов.РТГА.

Цель: серотипирование вируса гриппа А

Компоненты:1. Исследуемый материал — аллантоисная жидкость куриного эмбриона,2. Диагностические противогриппозные типоспецифиче-ские сыворотки,3. 5 % взвесь куриных эритроцитов.

4. Физиологический раствор.

Реакция ставится на стеклекапельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток иисследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвесиэритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, апри отрицательной выпадение хлопьев красного 

Реакция нейтрализациитоксинавзаимодействие токсина со специфическим антитоксином, приводящее к образованиюкомплекса, не обладающего токсичностью.

еакция нейтрализации наживотных применяется:- для определения специфической активности анатоксинов (дифтерийный,столбнячный и др.) по стандартной антитоксической сыворотке и по опытной дозетоксина.

Активность анатоксинов выражается в единицах связывания (ЕС), ЕС-количество анатоксина, которое целиком связывается с ШЕ/мл антитоксическойсыворотки;- для идентификации бактерий (возбудители газовой анаэробной инфекции,столбняка, ботулизма и др.

) по стандартной антитоксической сыворотке;

– для титрования антитоксических сывороток (противодифтерийная,противостолбнячная и др.) по стандартному токсину. Титрование — это определениеколичества антитоксинов в 1 мл сыворотки. Специфическая активность сыворотоквыражается в международных антитоксических единицах (МЕ).

1МЕ —минимальноеколичество сыворотки, которое способно нейтрализовать определенную дозутоксина, выражающуюся в стандартных единицах: смертельных, некротических илиреактивных дозах, в зависимости от вида токсина и способа титрования.

Титрование антитоксическихсывороток может производиться следующими методами:

Метод Эрлиха. Титрованиеантитоксических сывороток по известной смертельной (опытной) дозе токсина.

Проводится в 2 этапа:1) определение опытной дозы токсина. Смертельная доза — это количество токсина,которое в смеси с 1МЕ стандартной сыворотки вызывает гибель 50 % взятых в опытживотных;2) к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсина,инкубируют 45 минут и вводят животным. По результатам производят расчет

титра сыворотки.

Метод Ремера. Титрованиеантитоксических сывороток по известной некротической дозе токсина. Проводится в2 этапа:1) определение опытной некротической дозы токсина путём внутрикожного введенияморской свинке различного количества токсина со стандартной сывороткой.

Некротическая доза токсина — это его минимальное количество, которое в смеси с1/50МЕ стандартной сыворотки вызывает на месте внутрикожного введения некроз на4-5-и день;

2) к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсинаи вводят внутрикожно морской свинке.

По результатам производятрасчёт титра сыворотки. Так титруется противодифтерийная сыворотка.

Источник: //www.sites.google.com/site/mikrobiologiaekzamen/63

Ваш Недуг
Добавить комментарий