Райта реакция

Постановка реакции агглютинации (реакция Райта) на бруцеллез

Райта реакция

Реклама

Постановка реакции агглютинации (реакция Райта) на бруцеллез

1. Для постановки реакции агглютинации на бруцеллез применяются свежие сыворотки, не имеющие гнилостного запаха, значительной коагуляции белка и гемолиза. Допускается исследование сывороток, консервированных фенолом до 0,5%, со сроком их давности не свыше 15 дней.

2. Реакция ставится на физиологическом растворе (0,85%) поваренной соли в 4 разведениях: для свиней, коз, овец и собак 1 : 25; 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200, для крупного рогатого скота лошадей и верблюдов 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200; 1 : 400 в количестве 1 мл каждого разведения в пробирках с ровным выпуклым дном.

При массовых исследованиях допускается постановка реакции в двух первых разведениях: для свиней, овец, коз и собак 1 : 25 и 1 : 50, для крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов 1 : 50 и 1 : 100.

Для предохранения от прорастания посторонней микрофлорой рекомендуется постановка реакции на фенолизированном 0,5% физрастворе.

3. Контроль реакции ставится: а) с отрицательной — негативной сывороткой в тех же разведениях, как и испытуемые сыворотки; б) с положительной — позитивной сывороткой до предельного титра;

в) антиген с 1 мл физраствора.

4. Во все пробирки, в том числе и контроль, при постановке прибавляется 0,05 мл 10-миллиардного антигена, приготовленного согласно особой инструкции. Затем все пробирки тщательно встряхиваются до получения равномерной взвеси.

Допускается разлив сывороток в соответствующих дозах и микропипеткой. В этом случае антиген приливается по 1 мл, предварительно разведенный до 500 миллионов микробных тел в 1 мл.

Сыворотки разливаются в дозах 0,04, 0,02, 0,01 и 0,005, что соответствует разведениям 1 : 25; 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200.

5.

При разливе сывороток обязательна тщательная промывка пипеток после каждой сыворотки не менее 6 раз в двух-трех посудах.

6. После тщательного встряхивания пробирки ставятся на 4—10 часов в термостат при температуре 37—38°С, затем пробирки выдерживаются при комнатной температуре 24—18 часов.

Учет реакции производится макроскопически.

7. Диагностически положительной испытуемая проба сыворотки считается при наличии макроскопической агглютинации в разведении 1:50 для свиней, овец, коз и собак и 1 : 100 для крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов с оценкой их не менее чем на два креста.

8. Диагностически сомнительной испытуемая проба сыворотки считается при наличии макроскопической агглютинации только в разведении 1 : 25 для свиней, овец, коз, собак и 1 : 50 для крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов с оценкой не менее чем на два креста.

9. Все сыворотки, давшие агглютинацию в каких-либо разведениях, исследуются повторно из той же пробы в 4 разведениях: для свиней, овец, коз и собак: 1 : 25; 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200; для крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов: 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200; 1 : 400.При получении сомнительной реакции кровь от животного берется повторно через 3—4 недели.

10. При получении положительных или сомнительных реакций в ответе хозяйству указывается разведение, в котором получена реакция.

11. Сыворотки крупного рогатого скота, поступающие из хозяйств, в которых имелись или имеются аборты на почве бруцеллеза или выделяется значительное количество положительно реагирующих по реакции агглютинации (свежая инфекция), исследуются в 4 разведениях: 1 : 25; 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200.

При наличии макроскопической агглютинации в разведении 1 : 25, 1 : 50 не менее чем на два креста проба считается диагностически сомнительной.

Если через 3—4 недели при повторном исследовании сывороток сомнительно реагирующих животных титр агглютинации не будет превышать 1 : 25, то проба признается диагностически отрицательной.

12. Если при исследовании сывороток свиней и лошадей будут получены только сомнительные реакции (у свиней 1 : 25, у лошадей 1 : 50) и при повторной проверке этих животных титр агглютинации не повысится, то при условии отсутствия в хозяйстве клинических признаков бруцеллеза среди этих видов животных и реагировавших в более высоких разведениях пробы признаются диагностически отрицательными.

13.

Оценка реакции агглютинации в крестах:
++++ полное просветление жидкости при наличии явно выраженного зонтика (при встряхивании зонтик разбивается на хлопья, комочки и крупинки);
+++ те же явления, что отмечены для 4 крестов, но жидкость слегка опалесцирует (недостаточно полное просветление);
++ просветление жидкости выражено слабо, имеется наличие зонтика, который при встряхивании разбивается на хлопья, комочки и крупинки;
+ отсутствие или весьма незначительное просветление при наличии слабо выраженного зонтика или его следов, при встряхивании в жидкости заметны комочки и крупинки;
– отрицательная реакция агглютинации.

Отсутствие просветления и зонтика. Микробы могут оседать на дно в виде точки, при встряхивании разбиваются в равномерную муть.

-1- -2- -3- -4- -5- -6- -7- -8- -9- -10- -11- -12- -13- -14- -15- -16- -17- -18- -19- -20- -21- -22- -23- -24- -25- -26- -27- -28- -29- -30- -31- -32- -33- -34- -35- 

Источник: //techpharm.ru/lab_vet_text-35

Райта реакция

Райта реакция

Райта реакция (А. Е. Wright) — серологический метод лабораторной диагностики бруцеллезной инфекции.

Реакция Райта высоко специфична и становится положительной с самого начала болезни. Наиболее высокие титры реакции Райта (80% и выше) обычно наблюдаются через 1—2 мес. после начала заболевания и сохраняются на протяжении лихорадочного периода.

В дальнейшем титры реакции начинают падать, и к концу первого года заболевания реакция Райта, как правило, становится отрицательной. Появление и накопление агглютининов в крови больных бруцеллезом зависят от степени антигенного раздражения.

Поэтому наиболее высокие показатели титров агглютининов наблюдаются в фазе бактериемии, резко снижаясь по мере затухания инфекционного процесса.

Иногда реакция Райта сохраняется положительной до 2—3 и даже 5 лет после перенесенного заболевания. Однако в этих случаях следует иметь в виду возможность повторного заражения и рецидивов заболевания. В некоторых случаях классического бруцеллеза (см.

), подтвержденного выделением гемокультуры и положительной аллергической пробой, реакция Райта может быть отрицательной; это возможно при заражении организма измененным в антигенном отношении штаммом бруцелл.

Благодаря некоторой общности в антигенной структуре слабоположительные результаты реакции Райта могут быть у людей, инфицированных возбудителями туляремии, холеры, и при некоторых других инфекционных заболеваниях, а также у лиц, вакцинированных против этих инфекций.

Слабоположительная реакция Райта (в разведениях 1:50 и 1:100) иногда наблюдается и у здоровых женщин в последние недели беременности. Повторная постановка реакции Райта (наблюдение за ее динамикой) позволяет дифференцировать специфическую реакцию Райта от неспецифической, так как повышение титров указывает на наличие бруцеллезной инфекции.

Существенную роль в реакции Райта играет подбор штаммов для приготовления диагностикума (диссоциированные штаммы для этой цели не пригодны), а также концентрация применяемой микробной взвеси. Кроме антигена, источником ошибок может быть и исследуемая сыворотка. Она должна быть свежей, негемолизированной, прозрачной (без эритроцитов и пр.) и без признаков прорастания посторонней микрофлорой.

При постановке реакции Райта иногда наблюдаются так называемые проагглютинационные зоны, т. е.

отрицательный результат с малыми разведениями сыворотки и четко выраженный положительный результат при более высоких разведениях; возможно также выпадение агглютинации в средней части ряда разведений.

Явление это чаще наблюдается при высоких титрах сывороток и делает необходимым применение длинного ряда разведений. Появление феномена зоны, по-видимому, связано с наличием в сыворотках крови неполных (блокирующих) антител. Сыворотку крови для исследования получают обычным способом.

Реакцию Райта ставят всегда с двумя контролями: а) контроль каждой из исследуемых сывороток для исключения ложной агглютинации за счет выпадения белков самой сыворотки и б) контроль антигена — одна пробирка при любом количестве исследуемых сывороток — для исключения спонтанной агглютинации антигена. Физиол.

раствор, применяемый для разведения сыворотки и антигена, должен изготовляться на дистиллированной воде нейтральной реакции (рН=6,9—7,1) и во избежание прорастания содержать 0,5% карболовой кислоты. Реакцию Райта ставят не менее чем в пяти разведениях (1:50, 1:100, 1:200, 1:400 и 1:800) в объеме 1 мл каждое.

В качестве антигена применяют диагностикум, подтитрованный по национальной стандартной противобруцеллезной агглютинирующей сыворотке. Перед употреблением диагностикум разводят в 10 раз карболизированным (0,5%) физиологическим раствором. В 1 мл разведенного диагностикума содержится около 6-109 микробных клеток.

Учет реакции производят через 24 часа путем сравнения степени просветления в опытных пробирках с соответствующим стандартом мутности, который готовят следующим образом.

В 4 пробирки последовательно наливают 1, 2, 3 и 4 мл разведенного диагностикума, затем в том же порядке добавляют 3, 2 и 1 мл карболизированного физиологического раствора, в последнюю пробирку ничего не добавляют.

После взбалтывания содержимого берут по 0,5 мл антигена каждой концентрации и 0,5 мл карболизированного физиологического раствора.

Таким образом получают 4 пробирки стандарта мутности с различной степенью просветления (75% — 3—, 50% — 2 — и 25% — 1 — и отсутствие просветления), которые вместе с опытными пробирками помещают в термостат при t° 37° на 24 часа, после чего производят учет реакции. Для единой системы учета в настоящее время рекомендуют выражение титров сывороток в международных единицах антител (ME). Диагностическим титром исследуемой  сыворотки считается 50% агглютинации (2+).

Перечисление титра сыворотки на международные единицы производят следующим образом. Стандартизированный диагностикум со стандартной противобруцеллезной агглютинирующей сывороткой, содержащей 1000 ME антител в 1 мл, дает 50% агглютинации в разведении этой сыворотки 1 : 500.

Следовательно, титры исследуемой сыворотки 1 : 50, 1 : 100, 1 : 200 и т. д. с применением стандартизированного диагностикума указывают на то, что в 1 мл исследуемой сыворотки содержится 100, 200, 400 и т. д. международных единиц антител.

Таким образом, перечисление титра исследуемой сыворотки на международные единицы производят путем его удвоения.

При диагностической оценке результатов реакции агглютинации рекомендуется следующая схема: титр сыворотки 1 : 50 (100 ME) — результат сомнительный, 1 : 100 (200 ME)— слабо положительный, 1 : 200 (400 ME) — положительный, 1 : 200 и выше (800 ME)— резко положительный.

Источник: //www.medical-enc.ru/m/16/wright-reaction.shtml

Реакция Хеддельсона при диагностировании бруцеллеза

Райта реакция

Бруцеллёз – серьёзное заболевание, переносчиком которого являются домашние животные. Его опасность заключается в том, что симптомы бруцеллёза у человека схожи с теми, которые сигнализируют о начале простудного заболевания.

Между тем бруцеллёз поражает многие органы и без должного лечения способен привести к инвалидности. Для того чтобы своевременно выявить заболевание, в подавляющем количестве случаев достаточно сдать кровь на реакции Райта и Хеддельсона.

Данные методы являются быстрыми и информативными.

Этиология заболевания

Возбудителями бруцеллёза являются бактерии, имеющие название бруцеллы. Они устойчивы во внешней среде и погибают исключительно под воздействием высоких температур.

Основными носителями и переносчиками инфекции являются животные (в зависимости от вероятности заражения расположены в списке по убыванию):

  • овцы;
  • козы;
  • крупный рогатый скот;
  • свиньи;
  • зайцы;
  • олени;
  • собаки.

Как происходит заражение

Существуют следующие пути заражения человека:

  • контактный – при уходе за животными, разделывании туш, работе с навозом;
  • алиментарный – при употреблении в пищу мясных и молочных продуктов, не прошедших термическую обработку;
  • аэрогенный – при вдыхании воздуха с пылью, содержащей бруцеллы (например, в загонах и на пастбищах).

Бруцеллы жизнеспособны: в воде они сохраняют свою активность не менее 2 месяцев, в парном мясе – 3 месяца, в засоленном – 1 месяц, в молоке – 1,5 месяца, в брынзе – 2 месяца, в шерсти животного – 4 месяца.

Важно, что заболевание не передаётся от инфицированного человека здоровому.

Симптомы

В большинстве случаев симптомы бруцеллёза у человека схожи с простудными, иногда вовсе отсутствуют на раннем этапе развития заболевания.

Чаще всего бруцеллёз поражает следующие системы человеческого организма:

  • нервную;
  • сердечно-сосудистую;
  • опорно-двигательную;
  • мочеполовую;
  • репродуктивную;
  • пищеварительную;
  • зрительную;
  • лимфатическую.

Когда бруцеллёз переходит в хроническую форму (спустя 3 месяца после инфицирования), в организме человека происходят необратимые изменения, чаще всего приводящие к инвалидности. Симптомы проявляются тем ярче, чем тяжелее степень заболевания.

На начальной стадии отмечаются:

  • слабость, общее недомогание;
  • повышенная утомляемость;
  • дискомфорт при движении конечностями;
  • нервозность;
  • головная боль;
  • нарушение аппетита;
  • бессонница.

На более позднем этапе появляются следующие симптомы:

  • высокая температура тела (отметка на термометре может достигать 40 градусов), которую крайне тяжело или невозможно снизить;
  • сильные мышечные и суставные боли;
  • дискомфорт при любом движении тела;
  • повышенное потоотделение (наблюдается как в дневные, так и в ночные часы);
  • психические и эмоциональные расстройства.

На осмотре врач при пальпации обнаруживает увеличение в размерах печени, селезёнки и лимфоузлов.

Диагностика

Во время первичного приёма терапевту необходимо дать ответы на вопросы:

  • какие симптомы беспокоят;
  • профессиональная занятость;
  • имеется ли контакт с домашними животными;
  • район проживания.

При подозрении на бруцеллёз специалист назначает пациенту один из возможных видов диагностики или сразу несколько:

  • анализ крови;
  • пункция лимфоузлов;
  • пункция спинномозговой жидкости.

В подавляющем большинстве случаев диагноз исключается или подтверждается после анализа взятой у пациента крови.

Одними из самых эффективных методов лабораторной диагностики бруцеллёза являются реакции Хеддельсона и Райта.

Суть методов

Реакция Хеддельсона и реакция Райта – серологические методы (т. е. подразумевающие выявление и исследование антител в биоматериале человека), дополняющие друг друга.

На практике широко используются реакции агглютинации в пробирках (реакция Райта) и на стекле (реакция Хеддельсона). Тест на агглютинацию предполагает выявление антител, вступающих в реакцию с антигенами бруцелл. Изучение антител реакцией Хеддельсона широко применяется при необходимости обследования большого числа людей. Это обусловлено его простотой и эффективностью.

Реакция Хеддельсона: подготовка, расшифровка результата

Показаниями для анализа служат:

  • массовые вспышки инфекции;
  • частые контакты с домашними животными, в т. ч. по профессиональной необходимости;
  • оценка состояния иммунитета перед введением вакцины;
  • наблюдение за развитием уже имеющегося заболевания.

Перед тем как сдать кровь, необходимо подготовиться:

  • за 4 часа до забора крови запрещается принимать пищу, допускается пить только бутилированную негазированную воду;
  • за 1-2 дня рекомендуется снизить интенсивность физических нагрузок;
  • за 48 час. исключить курение и употребление алкогольных напитков.

Реакция Хеддельсона – качественный анализ, он не даёт информацию о количественном содержании антител.

Результаты анализа, их интерпретация:

  • «отрицательный» – в крови антитела не выявлены, бруцеллёз исключён;
  • «сомнительный» – необходимо сдать кровь повторно для подтверждения или исключения бруцеллёза, перед этим строго следовать правилам подготовки;
  • «положительный» – бруцеллёз подтверждён, нужно дополнительно сдать кровь на реакцию Райта для определения количественного содержания антител.

Реакция Райта: подготовка, расшифровка результата

Показаниями для анализа служат:

  • диагностика бруцеллёза;
  • количественное определение антител в крови и окончательное подтверждение диагноза после проведённого анализа крови на реакцию Хеддельсона.

Следует отметить, что, несмотря на большое количество серологических исследований, данный метод диагностики наиболее информативен.

Подготовка к анализу:

  • забор крови осуществляется в утренние часы натощак (минимум 4 часа до анализа запрещено употреблять пищу);
  • за 48 час. исключить курение и употребление алкогольных напитков;
  • за 7 дней рекомендуется значительно ограничить физические нагрузки.

Реакция Райта – количественный анализ, его результаты выдаются в виде числового значения титра:

  • 0-40 – результат отрицательный, бруцеллёз исключён;
  • 40-50 – результат сомнительный, требуется повторно сдать кровь на анализ, строго соблюдая правила подготовки;
  • 50-100 – не исключается наличие бруцеллёза, возможно 2 варианта: пациент уже когда-то перенёс бруцеллёз и в его организме имеются антитела, либо болезнь на начальной стадии развития; рекомендуется дополнительное обследование с целью подтверждения или исключения заболевания;
  • 100-200 – бруцеллёз подтверждён, высока вероятность перехода заболевания в хроническую форму;
  • свыше 200 – подтверждена острая форма бруцеллёза.

Реакции Райта и Хеддельсона на бруцеллёз – два уникальных метода диагностики, позволяющих выявить заболевание на любой стадии и определить количественное содержание антител, что позволяет своевременно начать лечение и подобрать максимально эффективную схему терапии.

Источник: //FB.ru/article/329623/reaktsiya-heddelsona-pri-diagnostirovanii-brutselleza

Реакция Райта: диагностика бруцеллеза в медицинской лаборатории

Райта реакция

Реакция Райта – это один из самых популярных методов диагностирования бруцеллеза во всех странах мира. Он имеет массу преимуществ: техника выполнения очень проста, чувствительность к возбудителю – высокая и кроме того показывает наличие титров в самом начале заболевания.

После седьмого дня болезни реакция достигает самого высокого значения; показатели сохраняются в течение нескольких лет. Реакция Райта используется как для диагностирования острого периода заболевания, так и для выяснения того, болел ли пациент бруцеллезом ранее.

Сроки выполнениядо 7-8 дней
Синонимы (rus) Иммунные антитела к антигену  бруцеллеза, анализ крови на бруцеллез
Cинонимы (eng)agglutination Wright, Brucella
Методы анализаРеакция агглютинации Райта
Подготовка к проведению анализаСдача крови натощак в утренние часы.
Следует отказаться от спиртных напитков и курения перед анализом.
Рекомендуется ограничить физические нагрузки за неделю перед тестом.
Биоматериал и способы его взятияДля исследования необходима венозная кровь

Бруцеллез – инфекционная зоонозная болезнь с долговременным рецитирующим течением, может протекать в острой и хронической форме. Возбудителями являются бактерии рода Brucella.

В период первичного заболевания пациент жалуется на высокую температуру тела; при врачебном осмотре отмечается увеличение лимфатических сосудов, а также увеличение крупных суставов. Кроме того, больной может ощущать сильную потливость даже при незначительных физических нагрузках.

Основными носителями Brucell являются крупный рогатый скот (Brucella melitensis), овцы и козы (Brucella abortus), свиньи (Brucella suis). Возбудитель от больных животных выделяется с испражнениями, мочой и молоком. Путь заражения человека – контактно-бытовой или через молочные продукты.

Как правило заболевание носит профессиональный характер (часто болеют ветеринарные работники, доярки и скотоводы). Лабораторная диагностика бруцеллеза проводится с помощью реакции агглютинации Райта. Метод исследования впервые был открыт в 1897 году английским бактериологом и инфекционистом А.

Райтом.

Специалист назначает пациенту анализ Райта в том случае, когда имеются признаки бруцеллеза:

  • суставная боль в коленях и локтях, а также визуальное увеличение их размеров;
  • болезненные судороги нижних конечностей;
  • высокая температура тела без явных признаков простуды;
  • повышенная усталость, быстрая утомляемость;
  • чрезмерное выделение пота;
  • нервозность, нарушение сна, повышенная раздражительность.

Вышеперечисленные признаки не всегда свидетельствуют о наличии бруцеллеза, однако для исключения инфекции все же рекомендуется сдать анализ.

Таблица 1. Расшифровка полученных данных анализа

ТитрРасшифровкаДетальное описание
1.менее 40отрицательныйБруцеллез не выявлен
2.40 – 50сомнительныйВозможно, бруцеллеза нет; рекомендуется повторная сдача анализа через 3-7 дней
3.50 – 100слабо положительныйНачало острого процесса либо антитела к заболеванию (болезнь была более года назад)
4.100 – 200положительныйОстрый бруцеллез, возможно переход в хроническую форму
5.200 и болеевысоко положительный Острый бруцеллез

Референсные значения могут отличаться в лабораториях в связи с применением разных марок оборудования для проведения исследования. Очень важно вовремя распознать и диагностировать заболевание, чтобы скорее приняться за лечение.

Помните: Выявление инфекции на ранней стадии увеличивает шансы скорейшего выздоровления!

Источник: //analizy-Sochi.ru/serologija/reakcija_rajta.html

Микробиологическая диагностика бруцеллеза

Райта реакция

Возбудители бруцеллеза (Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis и Brucella canis) высоко контагиозны и работа с ними проводится в специализированных лабораториях особо опасных инфекций. Постановку серологических реакций и аллерги­ческих проб для диагностики бруцеллеза производят соответственно в обычных микробиологических лабораториях и больничных условиях.

Главным резервуаром бруцелл являются домашние сельскохозяйственные животные, а также другие виды животных, от которых человек заражается преимущественно контактным или контактно-бытовым, реже алиментарным путем.

Клинические проявления бруцеллеза многообразны, поражаются лимфатическая, сосудистая, гепато-лиенальная системы и особенно опорно-двигательный аппарат Методы микробиологической диагностики бруцеллеза представлены в схеме 7.

Схема 7. Микробиологическая диагностика бруцеллеза

Материал: кровь, костный мозг, моча, испражнения, грудное молоко у кормящих женщин  

Серологический метод– постановка РА с сывороткой крови больного (реакция Райта, ставят в начале 2-й недели болезни, диагностический титр 1:200 и выше), ускоренной РА на стекле (реакция Хеддльсона), РСК и ИФА.

Диагностикумом в реакции Райта и Хеддльсона является взвесь убитых бруцелл с красителем генциановым фиолетовым или метиловым фиолетовым.

Реакцию агглютинации Хеддльсона ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят микропипеткой неразведенную исследуемую сыворотку в количествах 0,08; 0,04; 0,02; 0,01 и 0,02 мл, добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума, кроме по­следней дозы, в которую вносят 0,03 мл ФР (контроль сыворотки).

Контролем диагностикума является смесь из 0,03 мл антигена и 0,03 мл ФР. Все капли перемешивают стеклянной палочкой или бактериологической петлей и после легкого покачивания стекла наблюдают за появлением мелкозернистого окрашенного агглютината.

Отсутствие агглюти­нации во всех пробах сыворотки оценивается как отрицательная реакция, наличие агглютинации в 1-й пробе (0,08 мл сыворотки) – сомнительная, во 2-й (0,04 мл) – слабоположительная, в 3-й или 4-й пробах (0,02-0,01 мл) – положительная, во всех пробах – рез­ко положительная реакция.

Поскольку реакция агглютинации Хеддльсона иногда бывает положительной у здоровых людей за счет нормальных антител, она обязательно подтверждается реакцией Райта.

РИФ, РНГА, РСК и особенно ИФА более чувствительны, чем реакция агглютинации. Для ранней диагностики бруцеллеза особую ценность имеет ИФА, позволяющий выявить в сыворотке больных антибруцеллезные антитела класса IgM,которыев отличие от IgG по­являются в ранние сроки болезни, свидетельствуя о свежем инфицировании.

Аллергический метод –постановка внутрикожной аллергической пробы Бюрне с 15-20 дня заболевания.

Учет реакции проводится через 24-48 часов, положи­тельной считается реакция в случае появления на месте введения аллергена (бруцеллина) болезненности, гиперемии и инфильтрации кожи диаметром 3 см и более.

Положительная аллергическая ре­акция на бруцеллин сохраняется в течение длительного времени после перене­сенного бруцеллеза, а также после прививки.

Бактериологический метод– посев крови для выделения гемокультуры в 2 флакона с 50 мл печеночного или асцитического бульона (рН 7,1-7,2) или МПБ с добавлением 1 % глюко­зы, 2 % глицерина и антифаговой сыворотки (для инактивации бруцеллезного бактериофага) в первые дни болезни при наличии лихорадки. При отрицательных резуль­татах исследование повторяют, т.к. бактериемия наблю­дается в течение 1 года и более.

Один флакон выращивают в обычных аэробных условиях, другой — в герметично закрытом сосуде с 10 % углекислого газа (или СО2-инкубаторе) при температуре 370 С до 1 ме­сяца, делая пересевы на скошенный пече­ночный агар или эритрит-агар каждые 4-5 дней.

На жидких средах бруцеллы растут с образованием легкого помутнения и небольшого слизистого осадка, на плотных средах в виде округлых, диаметром до 5 мм, серовато-белых, блестя­щих, прозрачных с янтарным оттенком в проходящем свете колоний.

Типичные колонии пересевают на скошенный агар и идентифицируют выделенную культуру до уровня вида.

Выполняются также посевы ис­следуемого материала в желток свежего куриного яйца или в жел­точный мешок куриного эмбриона с последующей их инкубацией в течение 5 дней при 370 С и пересевом содержимого желточного мешка на плотные и жидкие питательные среды для выделения чистой культуры бруцелл.

Бруцеллы идентифицируют на основании изучения морфологических (рис. 13 – грамотрицательные коккобактерии), культуральных, биохимических (они не ферментируют уг-

Рис. 13. Возбудитель бруцеллеза (Brucella melitensis). Окраска по Граму. Мелкие грамотрицательные коккобактерии.

леводы, не свертывают молоко и не разжижают желатину, выделяют сероводород), антигенных свойств (постановка РА с моноспеци­фическими сыворотками против антигеновА, М, R), чувствительности к специфическому бактери­офагу и бактериостатическому действию анилиновых красителей (табл. 8).

Таблица 8.Дифференциация основных видов бруцелл

Признак Вид бруцелл
Br. melitensis Br. abortus Br. suis
Условия культивирования аэробные 10% СО2 аэробные
Рост на средах с красителями:
фуксином 1:50000 + +
тионином 1:25000 + +
пиронином 1:200000 + +
Образование Н2S ± ±
РА с монорецепторными сыворотками
А ± ± +
М ± ± ±
Чувствительность к бруцеллезному фагу + ±

. Обозначения: «-« – отрицательная; «+» – положительная; «±» – непостоянная реакции.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Источник: //studopedia.ru/10_139664_mikrobiologicheskaya-diagnostika-brutselleza.html

Ваш Недуг
Добавить комментарий