Питательные среды

2. Классификация питательных сред

Питательные среды

Приприготовлении питательных сред необходимоучитывать потребность культивируемых микроорганизмов в различных элементахпитания. Существует различные классификациипитательных сред.

Классификацияпитательных сред по составу:

1.Простыесреды(МПБ, МПА, желатин, пептонная вода).Мясо-пептонный бульон (МПБ) являетсябелковой основой всех сред. Существуетнесколько способов приготовления МПБ:

а) намясной воде с добавлением готовогопептона (продукт неполного перевариваниябелка) – это так называемый мясопептонныйбульон;

б) на переварахпродуктов гидролиза исходного сырьяпри помощи ферментов (трипсина – бульонХоттингера, пепсина – бульон Мартена).

Мясо-пептонный агар(МПА) – получают путей добавления к МПБarap-arapa(l,5-3%). Если МПА распределенпо диагонали пробирки или флакона –это скошенный агар.

Еслисреда распределе­на впробирке вертикально высотой 5-7 см,это агар столбиком. МПА,застывшийв чашках Петри в виде пластинки –пластинчатый агар.

Если среда имеетвертикальный слой высотой 2-3 см, идиагональный слойтакойже величины, это полускошенный агар.

2. Сложные средыготовятся на основепростых с определенными добавками(углеводы, кровь, желчь, яйца, сыворотка,молоко, соли, факторы роста и т.п.)

Классификацияпитательных сред по исходным компонентам:

1.Естественныепитатель­ные среды— это натуральный продукт животногоили ра­стительного происхождения.Могут быть:

  • Растительные (исходные продукты – соя, горох, картофель, морковь и т.п.)
  • Животные (исходные продукты – мясо, рыба, яйца, молоко, жи­вотные ткани, желчь, сыворотка крови.и т.п.)
  • Смешанные (МПА, среда Левенштейна – Йенсена и т.п.)

2.Искусственныесредысодержат переработанные естественныепродукты (мясную воду, перевар), вещества,полученные из этих продуктов (пептон,дрожжевой и кукурузный экстракты) иразличные добавки.

Это самая большая иразнообразная по составу наиболее частоприменяемая группа сред.

Их готовят поопределенным рецептам из различныхнастоев или отваров животного илирастительного про­исхождения сдобавлением неорганических солей,угле­водов и азотистых веществ.

3.Синтетическиесреды(известного химического состава) состоятиз химически чистых соединений в точноустановленных концентрациях (с добавлениемуглеводов, солей, аминокислот, витаминови т.п.). На основе этих сред, добавляя кним естественные или искусственныесреды получают полусинтетические среды.

Классификация питательных сред поконсистенции:среды бываютжидкие(среды без агара),полу­жидкие (сагаром до 1%),плотные(агаровые –1,5-2,5%).

Жидкие среды чаще применяют дляизучения физиолого-биохимическихосо­бенностей микроорганизмов, длянакопления биомассы и продуктов обмена.

Полужидкие среды обычно использу­ютдля хранения культур, плотные — длявыделения микроорганизмов, изученияморфологии колоний, диагно­стическихцелей, количественного учета, определенияан­тагонистических свойств и др.

Классификацияпитательных сред по целевому назначению:универсальные(общеупотребительные) и специальные.

Универсальные(основные) среды.

Эти среды используют для культивированиябольшинства относительно неприхотливыхмикроорганизмов или применяют в качествеосновы для приготовления специальныхсред, добавляя к ним кровь, сахар, молоко,сыворотку и другие ингредиенты,необходи­мые для размножения тогоили иного вида микроорганизмов.Кэтой группе отно­сятся: МПБ –мясо-пептонный бульон, МПА – мясо-пептонныйагар, МПЖ – мясо-пептонный желатин ит.п.

Специальные среды.Предназначеныдля выделения и избирательногокультивирования определенных видовмикроорганизмов, которыене растут на простых средах.

Различаютследующие виды специальных сред: средыобогащения, элективные,дифференциально-диагностические,консервирующие и среды накопления.

1. Средыобогащения.Многие микроорганизмы нерастут на обычных средах, поэтому дляповышения питательной ценности средыв нее добавляют углеводы (сахарныйбульон или агар) или белки (сывороточныйагар и бульон, кровяной агар и бульон).

Кровянойагар или кровяной бульон – получаютпутем добавле­нияк питательной среде 5-10% подогретойстерильной дефибринированнойкрови барана, кролика лошади, человека.Среда используется для выделениястрептококков, пневмококков и другихбактерий, а также для изучениягемолитической активности.

Сывороточныйбульон или сывороточныйагар получают, путем добавления к простымсредам 15-20% лошадиной или бычьей сыворотки.Среда применяется для выделенияпневмококков,менингококков.

2. Элективные (избирательные) среды.Эти среды предназначены для избирательноговыделения и накопления микроорганизмовопределенного вида из материала,содержащего несколько видов микробов.При посеве на них материала, содержащегосмесь раз­личных микроорганизмов,раньше всего будет проявлять­ся росттого вида, для которого данная средабудет электив­ной.

Избирательностьсреды достигается путем созданияусловий, оптимальных для культивированияопределенных микробов (рН, Eh, концентрациясолей, состав питательных веществ), т.е.положительной селекцией. Или путемдобавления в среду веществ, угнетающихдругие микроорганизмы (желчь, высокиеконцентрации NaCl, антибиотики и др.), т.е.отрицательной селекцией.

К этой группеотносятся:

Селенитовая среда– является лучшей средой обогащения длясальмонелл идизентерийных микробов Зонне. Селенитнатрия, содержащийся в среде, стимулируетрост этих бактерий и подавляет ростсопутствующей флоры.

Висмут-сульфит агар– содержит соли висмута,бриллиантовую зелень. Сальмонеллырастут на этой среде в видеколоний черного цвета. Другие видыбактерий на этой среде роста не дают.

Желточно-солевой агар(ЖСА) –среда для выделе­ниястафилококков, содержит до 10% хлориданатрия, что подавляет большинствобактерий, содержащихся в материале.

Кроме того, эта сре­даявляется и дифференциально-диагностической,так как присутствие яичногожелтка позволяет выявить ферментлецитиназу (лецитовителлазу),который образуют патогенные стафилококки.

Лецитиназа расщеп­ляетлецитин на фосфорхолины и нерастворимыев воде жирные кисло­ты,поэтому среда вокруг лецитиназоположительныхколоний мутнеет и появляетсяопалесцирующая зона в виде «радужноговенчика».

Желчныйбульон элективен для сальмонелл,размножение которых стимулируетдобавленная 10% желчь, одновременнотормозящая рост сопутствующихмикроорганизмов.

Щелочнойагар или щелочная пептонная водаэлективны для холерных вибрионов,щелочная реакциясреды (рН 9,0) не препятствует ростухолерных вибрионов, но тормозит ростдругих микроорганизмов.

3. Дифференциально-диагностическиесреды.Дифференциально-диагностическиесреды применяют для изучения биохимическихсвойств и отличия (дифференцировки)одного вида микроорганизмов от другогопо характеру их ферментативной активности.

Состав этих сред подбирают с такимрасчетом, чтобы четко выявить наиболеехарактерные свойства определенноговида микроорганизмов, основываясь наособенностях его обмена веществ.

Дифференцирующие свойства данных средсоздаются внесением субстрата, к которомуопределяется отношение микробов, ихферментативной активности и действиетоксинов (среды Гисса, среды Эндо, Левина,Плоскирева, Олькеницкого, висмут-сульфитагар и т.п.). По своему назначениюдифференциально-диагности­ческиепитательные среды подразделяютсяследующим об­разом:

  • Среды для выявления протеолитической и гемолитической способности микробов, содержащие в своем составе бел­ковые вещества: кровь, молоко, желатин и т. п. Наиболее распространенными средами являются мясо-пептонный желатин (МПЖ) свернувшаяся лошадиная сыворотка, молоко и кровяной агар (КА).
  • Среды с индифферентными химическими веществами, которые служат источником питания для одних видов микро­бов и не усваиваются другими видами. Например, среды, включающие вещества, ассимилируемые только опре­деленной группой бактерий. Наиболее распространенными средами данной группы являются цитратный агар Симмонса и цитратная сре­да Козера.
  • Среды с углеводами, многоатомными спиртами или индикаторами для обнаружения соответствующих ферментов и определения гликолитической активности микроорганизмов. Ферментативное расщепление субстратов приводит к сдвигу рН и изменению окрас­ки среды. Наиболее распространены цветные среды с различными угле­водами (например, с бромтимоловым синим, индикатором BP) и лакму­совое молоко (среда Минкевича). Также широко распространены среды Гисса, на которых учитывают различия в способности ферментировать различные углеводы с образованием кислоты, либо кислоты и газа. Для дифференцировки энтеробактерий применяют пептонную воду с набором различных углеводов, индикатором Андреде и поплавками, облегчающи­ми обнаружение газообразования и помогающие визуально определить изменение рН, характерное для различных микроорганизмов. В частности, сдвиг в кислую сторону вызывает покрас­нение среды с реактивом Андреде или пожелтение при использовании среды с бромтимоловым синим, тогда как при защелачивании индикатор Андреде и бромтимоловый синий не меняют цвет среды. Например, для выделе­ния патогенных бактерий из кишечника применяют среды, которые позво­ляют дифференцировать патогенные микроорганизмы от постоянных оби­тателей кишечника – микроорганизмов, разлагающих лактозу. Такой сре­дой является среда Эндо, в состав которой входит лактоза. Основными компонентами среды Эндо являются МПА, лактоза и основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Исходная питательная среда окраше­на в светло-розовый цвет. При сбраживании лактозы образуется ацетальдегид, который реагирует с сульфитом и, высвободившийся при этом, фуксин окрашивает колонии в ярко-крас­ный цвет. Поэтому кишечная палочка, которая сбраживает лактозу, при росте на этой среде образует красные колонии с металлическим блес­ком, а сальмонеллы и шигеллы – бесцветные, так как они не сбраживают лактозу.
  • Среды для определения редуцирующей способности микроорганизмов. В эту группу входят среды с красками, обесцвечивающимися при восстановлении под действием окислитель­но-восстановительных ферментов (на­пример, метиленовый синий, кислый фуксин, бромтимоловый синий), а также среды с нитратами для опреде­ления денитрифицирующей активности бактерий (при положительном ре­зультате среды окрашиваются в синий цвет). Изменяя свою окраску при различных значениях рН, индикатор указывает на нали­чие или отсутствие расщепления, окисления или восстанов­ления введенного в среду ингредиента. Однако индикатор не является обязательной составной частью сред, предназначен­ных для выявления ферментов. Так, наличие желатиназы и других протеолитических ферментов в культуре определяют по разжижению желатина, свернутого яичного или сыворо­точного белка.

4. Среды накопления,на которыхпроисходит быстрый рост определенныхвидов микроорганизмов.

5. Консервирующие среды.Предназначеныдля сохранения микроорганизмов во времятранспортировки к месту исследований.Этисреды, содержатдобавки, предупреждающиеразмножение и гибель микробов, чтоспособствует сохранению ихжизнеспособности.Наибольшее применение нашли глицериноваясмесь (среда Тига), гипертоническийра­створ,фосфатно-буфернаясмесь.

Стерилизация питательных сред. Всепитательные среды независи­мо от ихназначения разливают в чистую посудуи стери­лизуют. Большинство средстерилизуют автоклавированием, но приразличных режимах в зависимости от ихсо­става.

1. Синтетические среды и все агаровыесреды, не содер­жащие в своем составенативного белка и углеводов, стери­лизуют15—20 мин в автоклаве при температуре115—120°С и давлении 1-1,5 атмосферы.

2. Среды с углеводами и молоком (в составкоторого вхо­дит лактоза), питательныйжелатин стерилизуют текучим паром притемпературе 100°С дробно или в автоклавепри 112°С и давлении до 1 атмосферы.

3. Среды, в состав которых входят белковыевещества (сыворотка крови, асцитическаяжидкость), обеспложивают­ся тиндализациейили фильтрованием.

4. Для стерилизации питательных сред,содержащих в своем составе нативныебелки, пользуются фильтрацией че­резмембранные фильтры Зейтца.

Для контроля стерильности среды послестерилизации помещают в термостат при37°С на 3-5 сут.

Жидкие среды должныоставаться прозрачными, а на поверхностии в толще плотных питательных сред недолжны появляться признаки роста.

Кромеконтроля стерильности, произво­дятхимический контроль готовых сред,который заклю­чается в том, что внескольких образцах каждой серииопределяют рН, количество общего иаминного азота и хлоридов.

Существует также биологический контрольсред. В этом случае несколько образцовсреды засевают лабо­раторной культуройтого микроба, для которого приготовленасреда, и изучают характер его роста.Только после того, как среды выдержаликонтроль, их можно использовать поназначению.

Источник: //studfile.net/preview/4104311/page:18/

Питательные среды — Медицинская энциклопедия

Питательные среды

Пита́тельные среды

Субстраты, состоящие из компонентов, обеспечивающих необходимые условия для культивирования микроорганизмов или накопления продуктов их жизнедеятельности.

Питательные среды различаются по назначению, консистенции и составу. По назначению их условно подразделяют на две основные группы — диагностические и производственные среды. Диагностические П. с.

включают пять подгрупп: среды для выращивания широкого спектра микроорганизмов; среды для выделения конкретного возбудителя; дифференциальные среды, позволяющие различать отдельные виды микроорганизмов; среды для идентификации микроорганизмов и накопительные среды, предназначенные для обогащения конкретного вида микроорганизмов.

К числу производственных относятся П. с., используемые при промышленном изготовлении медицинских биологических препаратов (бактериальных вакцин, анатоксинов и др.) и контроле их качества. П. с.

для производства бактерийных препаратов в отличие от диагностических сред не должны содержать вредных для человека примесей и оказывать отрицательного влияния на процесс производства (не препятствуя, в частности, удалению из изготавливаемых препаратов продуктов микробного метаболизма, балластных органических и минеральных веществ).

По консистенции различают жидкие, плотные и полужидкие среды. Плотные и полужидкие П. с. готовят из жидких посредством прибавления к ним агара или (реже) желатина. Агар-агар — полисахарид, получаемый из определенных сортов морских водорослей. Агар обычно вносят в П. с.

в концентрации 1—2% (при изготовлении полужидких сред — 0,2—0,4%), желатин — 10—15%. При t° 25—30° желатиновые среды плавятся, поэтому микроорганизмы на них выращивают преимущественно при комнатной температуре.

В качестве плотных сред применяют также свернутую сыворотку крови, свернутые яйца, картофель и среды, содержащие 1,5% силикагеля.

По составу П. с. делят на простые и сложные. Простые П. с. обеспечивают питательные потребности большинства патогенных микроорганизмов (мясопептонный бульон, мясопептонный агар, бульон и агар Хоттингера, питательный желатин, пептонная вода и др.). К сложным относят специальные среды для микробов, которые не растут на простых П. с.

Такие среды готовят, прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества, необходимые для размножения того или иного микроорганизма. Сложными П. с. являются и дифференциально-диагностические среды, например среды Гисса с углеводами и индикатором, применяемые для определения видовой принадлежности исследуемого микроба по его ферментативной активности.

Некоторые сложные среды, так называемые селективные, или элективные, используют для целенаправленного выделения одного или нескольких видов микроорганизмов путем создания оптимальных условий их выращивания и угнетения роста сопутствующей микрофлоры.

Например, висмут-сульфитный агар — строго селективная среда для выделения сальмонелл, агар и среда Левина — слабоселективные среды для выделения энтеробактерий.

В зависимости от состава исходных компонентов различают также среды синтетические, полусинтетические и природного происхождения. Синтетические среды, составные части которых точно известны, и несколько в меньшей степени полусинтетические удобны и используются главным образом для изучения физиологических процессов микроорганизмов.

Применение сред такого типа позволяет определить минимальные потребности отдельных микроорганизмов в питательных веществах и, исходя из этого, создать П. с., содержащие лишь те соединения, которые необходимы для роста данного микроба. Преимуществом синтетических П. с.

является также их стандартность, однако использование этих сред ограничено из-за высокой стоимости и сложности состава многих из них (нередко они содержат до 40 и более ингредиентов). К тому же они более чувствительны к нарушениям баланса между некоторыми компонентами П. с.

, особенно аминокислотами, и размножение микроорганизмов на таких средах легче подавляется избыточной аэрацией или токсическими катионами.

В микробиологической практике продолжают широко использовать среды природного происхождения, химический состав которых известен недостаточно.

Основу таких сред изготавливают из различного сырья животного или растительного происхождения: мяса и его заменителей, рыбы, крови животных, казеина, дрожжей, картофеля, сои и др.

Вид и качество этого сырья по существу во многом предопределяют питательную ценность и стандартность применяемых основ и в значительной мере самих сред.

Наряду с белковыми основами П. с. должны содержать зольные элементы (фосфор, серу, кальций, магний, железо) и микроэлементы (бор, молибден, кобальт, марганец, цинк, никель, медь, хлор, натрий, кремний и др.).

Эти вещества необходимы для многих биосинтетических процессов у бактерий, однако потребность в них у разных видов микроорганизмов неодинакова. Так, например, марганец и железо требуются для кишечной палочки и возбудителей чумы, а калий — для молочнокислых бактерий.

Марганец, кальций, магний, калий и железо стимулируют рост сибиреязвенной палочки, а магний, железо и марганец — рост бруцелл.

Для культивирования многих патогенных микроорганизмов необходимо наличие в среде так называемых факторов роста, представленных прежде всего водорастворимыми витаминами.

Хотя бактерии не используют эти вещества как пластический или энергетический материал, тем не менее они являются обязательными компонентами питательных сред, т.к. их отсутствие тормозит образование многих ферментов.

Факторами роста могут быть также некоторые органические кислоты, пуриновые и пиримидиновые основания и аминокислоты. Отдельные аминокислоты (L-цистин, D—пироглутаминовая кислота и др.) способны стимулировать рост одних микроорганизмов и, наоборот, угнетать рост других.

Питательные среды должны содержать все необходимые для выращиваемых микроорганизмов химические элементы в легко усвояемой форме и оптимальных количествах. Источником углерода в П. с. обычно служат отдельные углеводы, соли органических кислот, а также углерод, входящий в состав азотсодержащих соединений (белков, пептонов, аминокислот и др.).

Потребности в азоте удовлетворяются при наличии в средах нативного животного белка (кровь, сыворотка, асцитическая жидкость и т.п.), пептонов, аминокислот, солей аммония и других азотсодержащих веществ (пуриновые и пиримидиновые основания, мочевина и др.). В питательные среды вносят минеральные соли, необходимые для микроорганизмов.

Микроэлементы, требующиеся бактериям в ничтожно малых количествах, обычно попадают в П. с. либо с водой, которая используется для приготовления среды, либо с сырьем, входящим в состав П. с.

Факторы роста поступают в среду с различными диализатами, экстрактами и аутолизатами в виде аминокислот, пептидов, пуриновых и пиримидиновых оснований и витаминов.

Белоксодержащее сырье, используемое для приготовления П. с., подвергается гидролизу с помощью различных ферментов (пепсина, трипсина, панкреатина, папаина, грибковых протеаз и т.п.) или кислот (реже щелочей).

Целью гидролиза является растворение и расщепление протеина с образованием азотистых соединений, усвояемых микробной клеткой: пептонов, полипептидов, аминокислот, которые входят в состав получаемых таким путем гидролизатов.

Для удовлетворения питательных потребностей каждого конкретного вида микроорганизмов используют те или иные гидролизаты в зависимости от их химического состава либо в состав П. с. одновременно вводят несколько гидролизатов в отработанных соотношениях.

Конструируемая П. с. по своему составу и физико-химическим свойствам должна соответствовать условиям естественного обитания микроорганизмов. Различия их питательных потребностей столь многообразны, что исключают возможность создания универсальной П. с. Поэтому современные принципы разработки сред основываются на всестороннем изучении питательных потребностей микроорганизмов.

Необходимо, чтобы П. с. не только содержали нужные микробам питательные вещества, но и имели оптимальную концентрацию водородных и гидроксильных ионов. Большинство патогенных микроорганизмов лучше растут на П. с. со слабощелочной реакцией (рН 7,2—7,4).

Исключением являются холерный вибрион, оптимум роста которого находится в щелочной зоне (рН 8,5—9,0), и возбудитель туберкулеза, нуждающийся в слабокислой реакции (рН 6,2—6,8). Для предотвращения изменения рН в процессе культивирования микроорганизмов в П. с.

добавляют фосфатные буферы — смесь одно- и двузамещенного фосфатов калия, концентрация которых в среде не должна превышать 0,5%.

Питательные среды должны иметь достаточную влажность и быть изотоничными для микробной клетки, что обеспечивает нормальное течение в ней важнейших физико-химических процессов.

Для большинства микроорганизмов оптимальной является среда, соответствующая 0,5% раствору натрия хлорида. Одним из существенных требований, предъявляемых к П. с.

, служит их стерильность, позволяющая выращивать чистые культуры микробов.

Важная роль в получении П. с. надлежащего качества принадлежит методам их контроля. Для применяемых в производстве питательных сред главным показателем качества служит эффективность (урожайность) сред, т.е. способность накопления максимального количества биомассы полноценных по свойствам микроорганизмов или продуктов их биосинтеза (токсинов и др.).

В оценке диагностических П. с. ведущим критерием является показатель чувствительности — способность обеспечить рост микроорганизмов в максимальных разведениях культуры возбудителя. В зависимости от назначения П. с.

при оценке их качества используют также и другие показатели — стабильность основных свойств выращиваемых микроорганизмов и скорость их роста, выраженность дифференцирующих свойств и т.п.

При решении вопросов качества П. с. немаловажное значение придается их стандартизации, чему способствует изготовление сред в виде сухих препаратов. В СССР налажен промышленный выпуск сухих сред разного назначения: простых, селективных, дифференциально-диагностических и специальных.

Библиогр.: Козлов Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии, М., 1950, библиогр.; Лабораторные методы исследования в клинике, под ред. В.В. Меньшикова, с. 315, 343, М., 1987; Мейнелл Дж. и Мейнелл Э.

Экспериментальная микробиология, пер. с англ., с. 46, М., 1967; Микробиологические методы исследования при инфекционных заболеваниях, под ред. Г.Я. Синая и О.Г. Биргера, с. 64, М., 1949; Энтеробактерии, под ред. В.И.

Покровского, с. 258, М., 1985.

Источник: Медицинская энциклопедия на Gufo.me

Источник: //gufo.me/dict/medical_encyclopedia/%D0%9F%D0%B8%D1%82%D0%B0%D1%82%D0%B5%D0%BB%D1%8C%D0%BD%D1%8B%D0%B5_%D1%81%D1%80%D0%B5%D0%B4%D1%8B

Питательные среды

Питательные среды

Питательные среды — биологические препараты, используемые для выращивания микроорганизмов и изучения культуральных, биохимических, антигенных свойств, фаголизабельности и чувствительности к антибиотикам.

Питательные среды широко используют в лабораторной практике при диагностике инфекционных заболеваний, а также для контроля за стерильностью лекарственных средств. Для того чтобы микроорганизмы росли и развивались, питательные среды должны отвечать следующим требованиям.

1. Оптимальный состав. В их состав должны входить все необходимые компоненты, которые нужны для развития микробов: белки, витамины, углеводы, минеральные вещества.

2. Оптимальное значение pH. Большинство микроорганизмов развивается при pH 7,2…7,4.

3. Стерильность. Она необходима для того, чтобы избегать конкурентной борьбы между микробами.

4.

Прозрачность. Для лучшего изучения характера микробных колоний.

5. Влажность. Питание и дыхание осуществляются путем осмоса и диффузии, поэтому питательные среды должны быть слегка влажными.

Классификация сред. Питательные среды подразделяют по следующим признакам.

1. По консистенции: а) плотные (твердые) — агара 1,2…2 % (мясопептонный агар); б) полужидкие — агара 0,2…0,3 % (полужидкий агар); в) жидкие — мясопептонный бульон.

Для придания средам плотной или полужидкой консистенции чаще всего используют агар-агар — полисахарид, выделяемый из морских водорослей.

Агар способен образовывать в воде гель, плавящийся при 80…100 °С и затвердевающий при 37…40 °С.

Устойчивость агара к разжижающему действию большинства микроорганизмов, а также способность образовывать прочные студни обусловили его широкое применение в бактериологии.

2. По происхождению: а) искусственные: животного (МПА, МПБ) и растительного происхождения (пивное сусло); б) естественные: животного (кровь, молоко) и растительного происхождения (кусочки картофеля).

3. По составу: а) белковые; б) безбелковые; в) минеральные.

4.

По назначению: а) среды для культивирования (простые, специальные); б) среды для обогащения (для накопления микроорганизмов при их низкой концентрации в исходном материале); в) среды консервирующие для первичного посева и транспортировки патогенов; г) среды для идентификации (дифференциально-диагностические) — микробы одного вида образуют колонии, отличающиеся по внешнему виду от колоний других микроорганизмов.

Если материал слабо загрязнен посторонней микрофлорой, то для выделения культур применяют простые среды общего назначения (МПА), при обильной контаминации сапрофитами используют специальные среды: элективные (для отдельных видов) и дифференциально-диагностические (для облегчения идентификации).

Характеристики сред. Консервирующие транспортные среды (глицериновая смесь, фосфатный буфер, тиогликолевая среда для анаэробов и др.). Предупреждают отмирание патогенных микробов и подавляют рост сапрофитов.

Среды обогащения (селективный бульон, желчный бульон, среда Мюллера, Раппопорт, среда Кауфмана, щелочная пептонная вода).

Применяют для накопления определенной группы бактерий за счет создания условий, оптимальных для одних видов и неблагоприятных для других.

Наиболее часто используют различные красители и химические вещества — соли, желчные кислоты, теллурит калия, антибиотики, фуксин и т. д.

Элективные (селективные среды). Обеспечивают более благоприятные условия для изолируемого микроба с одновременным подавлением сопутствующей микрофлоры. Например, среды Плоскирева и солевой агар применяют для первичного посева материала или для пересева с консервирующих сред или сред обогащения с целью получения чистой культуры.

Дифференциально-диагностические среды. Предназначены для определения видовой принадлежности исследуемого микроба, основываясь на особенностях его обмена веществ.

Среды для выявления протеолитической, гемолитической способности микробов. Содержат в своем составе белковые вещества (кровь, молоко, желатин и др.).

Среды с индифферентными химическими веществами. Служат источником питания для одних видов микробов и не усваиваются другими видами (цитратный агар Симмонса).

Среды с углеводами (моносахариды, дисахариды, полисахариды), многоатомными спиртами (сорбит, маннит), гликозидами (салицин, инозит) для обнаружения соответствующих ферментов.

Среды для определения редуцирующей способности микробов. В своем составе содержат краски, обесцвечивающиеся при восстановлении (агар Омелянского с индигокармином), а также нитраты для определения денитрифицирующей способности микроорганизмов.

Сухие питательные среды. В бактериологических лабораториях используют в основном коммерческие сухие среды. Они представляют собой высушенные и измельченные до порошкообразного состояния готовые питательные среды.

У сухих сред имеется ряд преимуществ перед средами обычного изготовления: их можно хранить длительно в сухом затемненном помещении в герметически закрытой таре, они транспортабельны, удобны в применении и стандартны, что облегчает получение сравнимых результатов при бактериологическом исследовании.

Плотные среды состоят из питательной основы, агар-агара, индикаторов и других органических и минеральных веществ, улучшающих рост одних и задерживающих рост других микроорганизмов.

В качестве питательной основы сухих сред используют различные источники белка. За рубежом сухие среды чаще всего изготавливают на мясопептонном бульоне, требующем большого расхода говяжьего мяса. В нашей стране в качестве источника белка используют гидролизаты кильки, казеина, кормовых дрожжей.

Для упаковки сухих питательных сред используют стеклянные банки из оранжевого стекла (250 г), полиэтиленовые банки (250, 500, 1000 г), а также пакеты из трехслойной ламинированной бумаги (50…200 г). Сроки хранения в стеклянных и полиэтиленовых банках составляют 2…4 года, а в пакетах из трехслойного ламината — от 1 года до 4 лет.

Отечественная промышленность выпускает более 120 наименований различных сухих питательных сред. Крупнейшими производителями являются ФГУП НПО «Питательные среды» (г. Махачкала) и ГНЦПМ (г. Оболенск) (Меджидов М. М. Справочник по микробиологическим питательным средам. — М.: Медицина, 2003). Наиболее часто применяют в практических лабораториях следующие среды.

Сухие дифференциально-диагностические среды. Если раньше в практике ветеринарных бактериологических лабораторий для идентификации микроорганизмов широко использовались среды Гисса, содержащие какой-либо одни углевод, то в последнее время все шире стали применяться среды, позволяющие дифференцировать микроорганизмы по двум-трем признакам.

Среда Росселя (ФГУП НПО «Питательные среды»). Предназначена для первичной идентификации энтеробактерий. Готовая среда имеет зеленый цвет.

После посева культуры через 18…20 ч инкубации при 37 °С о ферментации лактозы судят по появлению желтой окраски в скошенной части агара, а о ферментации глюкозы — по желтой окраске столбика агара.

О газообразовании заключают по появлению пузырьков, разрывам агара. Если микроорганизм не ферментирует глюкозу и лактозу, то среда остается зеленой или приобретает синий цвет.

Среда Клиглера (ФГУП НПО «Питательные среды», г. Махачкала и АООТ «Биомед» им. И. И. Мечникова, г. Москва). Предназначена для первичной идентификации энтеробактерий. Готовая среда имеет красный цвет. Скашивать необходимо так, чтобы остался столбик высотой 2.5…3 см. Посев производят сначала в толщу среды, а затем по скошенной поверхности.

Через 18…20 ч инкубации при 37 °С учитывают результаты. Если микроорганизм ферментирует лактозу, то скошенная часть агара приобретает желтый цвет. При сбраживании глюкозы среда желтеет в столбике. При газообразовании — появление пузырьков и разрывы агара. В случае образования сероводорода среда приобретает черный цвет.

Продуцирование индола определяют при помощи специальных индикаторных бумажек.

Двухслойный железоглюкозолактозный агар с мочевиной. Среда Олькеницкого (ФГУП НПО «Питательные среды»).

Эти среды позволяют идентифицировать бактерии по их способности ферментировать глюкозу и лактозу, образовывать сероводород и расщеплять мочевину.

С подробной инструкцией о приготовлении, способе посева микроорганизмов и учете результатов можно ознакомиться в «Справочнике по микробиологическим питательным средам» М. М. Меджидова.

Сухие элективные питательные среды. Элективный солевой агар (СА) (ФГУП НПО «Питательные среды» и ФГУП «Аллерген», г. Ставрополь).

Предназначен для выделения стафилококков из исследуемого материала. Может служить основой для приготовления желточно-солевого или молочно-солевого агара.

При посеве материала на СА через 48 ч инкубации при 37 °С рост стафилококков в виде круглых колоний диаметром 2…4 мм.

Элективно-питательная среда для выделения пневмококка (пневмококк-агар) (ФГУП НПО «Питательные среды»). Предназначена для элективного выделения пневмококка из патологического материала (крови, мокроты, гноя).

Готовая среда имеет коричневый цвет.

Через 24…48 ч после посева материала и инкубации его при 36…38 °С в условиях «свечного сосуда» пневмококк образует на среде выпуклые колонии размером до 1 мм, хорошо отличимые от бледно-розовых колоний стафилококка.

Питательная среда для изоляции грибов рода Candida (кандида-агар) (ФГУП НПО «Питательные среды», г. Махачкала). Предназначена для выделения грибов рода Candida из инфицированного материала и объектов внешней среды.

Среда не подлежит автоклавированию. Грибы рода Candida на этой среде через 22…24 ч инкубации при 37 °С образуют плотные выпуклые или плоские колонии сметанообразной консистенции с ровными или волнистыми краями размером 1…2 мм.

Среда подавляет рост сопутствующей бактериальной флоры (кишечной палочки, протея, стафилококка).

Селективный агар для выделения и предварительной идентификации энтеробактерий в моче (аналог агара Мак-Конки) (ФГУП НПО «Питательные среды»). Рекомендуется для выделения и предварительной идентификации энтеробактерий из мочи, а также может быть использован при бактериологическом исследовании пищевых продуктов, фекалий, сточных вод.

Готовая среда красно-коричневого цвета, прозрачная, с легкой опалесценцией.

Через 16…20 ч инкубации посева при 37 °С лактозоотрицательные сальмонеллы образуют прозрачные бесцветные колонии, лактозоположительные эшерихии — колонии ярко-малинового цвета.

Среда подавляет «роение» протеев, которые растут в виде бесцветных изолированных колоний в О-форме. Рост стафилококков полностью подавляется.

Питательные среды других групп. Гликолевая среда (ФГУП НПО «Питательные среды», г. Махачкала; ОАО «Биомед» им. И. И. Мечникова, г. Москва). Предназначена для контроля стерильности медицинских и биологических препаратов. Учет результатов проводят согласно инструкции «Испытание лекарственных средств на микробиологическую чистоту».

Питательные среды № 1 и 2 выпускают ФГУП НПО «Питательные среды» (г. Махачкала) и ФГУП «Аллерген» (г. Ставрополь).

Питательная среда для контроля микробной загрязненности сухая № 1. Используют для определения общей обсемененности нестерильных лекарственных препаратов и пищевых продуктов.

Питательная среда для контроля микробной загрязненности (Сабуро-агар) № 2. Рекомендуется для культивирования грибов, а также определения содержания грибов в нестерильных лекарственных средах и других объектах внешней среды.

Эритрит-агар и эритрит-бульон. Предназначен для выделения и культивирования бруцелл.

Питательная среда для выделения и культивирования сибиреязвенного микроба.

Кетоглутаровый агар. Эффективен для изоляции и культивирования возбудителя туляремии.

Питательная среда для листерий. Рекомендуется для изоляции листерий из инфицированного материала (кровь, ликвор, околоплодные воды и др.) и культивирования штаммов.

Среда АГВ. Предложена для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам дискодиффузным методом.

Питательная среда для экспресс-определения антибиотикочувствительности условно-патогенных бактерий. Предложена для ускоренного определения антибиотикочувствительности грамотрицательных условно-патогенных микроорганизмов. Учет результатов можно проводить через 4…5 ч.

Ассортимент выпускаемых отечественной промышленностью сухих питательных сред постоянно расширяется. Приведено лишь небольшое количество тех, которые могут быть использованы в повседневной работе ветеринарных лабораторий.

Кроме того, в настоящее время имеется возможность приобретать и импортные питательные среды. Коммерческие названия можно узнать, заказав соответствующие каталоги.

Однако их внедрение и широкое использование в ветеринарных лабораториях РФ возможно лишь в отдаленной перспективе из-за довольно высокой стоимости. Кроме того, в этой главе не упомянуты готовые коммерческие питательные среды довольно хорошего качества производства НИЦФ (г.

Санкт-Петербург). Они расфасованы во флаконы по 400 мл; срок хранения 1 год. Среды, безусловно, могут быть полезны при проведении бактериологических работ в полевых условиях.

, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Источник: //www.activestudy.info/pitatelnye-sredy/

Микробиология и питательные среды

Питательные среды

Доброго времени суток! Не так давно любезный @MrBarinOFFF выложил пост о питательных средах и росте микроорганизмов на них, и я пообещала выложить пост о питательных средах.

Начну я пожалуй вообще с определений. Микробиология делится на несколько видов, например, общая, клиническая, промышленная, альгология (о сине-зеленых водорослях), санитарная. Я работаю в контроле качества на заводе, соответственно моя микробиология – санитарная – асептика и дезинфекция.

Разница с той же клинической, или, как её ещё называют, медицинской, заключается в том, что для клинической важно выделение конкретного вида бактерии, её штамма и серовара, от чего будет зависеть лечение.

Для санитарной микробиологи характерно изучение микробиологической загрязненности объектов окружающей среды, пищевых продуктов, косметики и лекарств. Для таких исследований не важен вид микроорганизма (кроме группы санитарно-показательных микроорганизмов), а важно количество.

Например, в таблетках допускается количество бактерий 1000 в одном грамме, в сумме с дрожжами и плесенями.

Стоит отметить, что это довольно строгая норма, так как потребитель таблеток, скорее всего, больной человек и ухудшать его состояние дополнительными нагрузками в виде микрофлоры чревато для его здоровья. В тех же продуктах питания, употребляющихся в готовом виде, норма будет в пару-тройку раз выше.

При этом микробиологу контроля качества не важно, кто входит в эту тысячу микроорганизмов – сапрофитов (непатогенные микроорганизмы).

Как же так, спросите вы, ведь среди них могут попасть и вредные, типа патогенной кишечной палочки, и будете правы.

Именно для избежания попадания патогенной микрофлоры в продукты питания, косметику, etc выделили специальную группу микроорганизмов, обозвали её санитарно-показательные микроорганизмы.

Бактерии проходили целый кастинг на право состоять в этой группе – они должны: постоянно содержаться в выделениях человека/животного и поступать в окружающую среду в больших количествах, нигде не должны жить, кроме как у человека и животных, быть способны сохраняться длительное время в окружающей среде, сохранять свой генотип, должны быть типичными и легко определяемыми.

Идеально подойти все равно никто никогда не может, но это не беда.

Итак, вашему вниманию представляются:

Escherichia coli, известная многим как кишечная палочка, и её группа поддержки – БГКП ( бактерии группы кишечной палочки).

Выделяется постоянно, живет у человека в кишечнике, при определенных условиях может вызывать диарею, колит и прочие кишечные гадости. При попадании в любой другой орган могут вызвать их воспаление (перитониты, менингиты и прочее). Обладает кучей способностей в области биохимии, в совокупности позволяющих её выделить. Фактически всегда – показатель фекального загрязнения окружающей среды. Поэтому важно мыть руки после туалета.

Pseudomonas aeruginosa, синегнойная палочка.

Самая красивая, обладает чудесным сине-зеленым цветом колоний, пахнет приятно, клубничным мылом как утверждают нормативные документы, по моим личным ощущениям- жасмином. Поражает все органы, гадит везде, как можно понять из названия – вызывает гнойные воспаления. Устойчива к большинству антибиотиков.

Staphylococcus aureus, золотистый стафилококк.

Многие люди являются его носителями, им он может и не вредить. Его патогенные штаммы могут вызывать гнойные заболевания кожи, пневмонии, ангины, сепсис, и его отвратительный коронный номер – синдром “ошпаренных” младенцев (предупреждаю, будете гуглить – там жесть жестокая). Ещё у него есть чудесная способность прятаться от иммунитета, “приклеивая” к себе антитела, и иммунитет принимает его за своего, пропуская. Золотистым назван за цвет колоний, очень красивый.

Candida albicans, кандида.

Представитель дрожжей. Вкусно пахнет хлебом при росте на агаре, вызывает молочницу. Кандидозы бывают не только у женщин, частная болячка для детей, кандидоз нёба. Лечится долго и противно, очень сильными таблетками. Из всех микроорганизмов, про которые я здесь упомянула, считается самой опасной, относится к III группе патогенности, остальные к IV.

Salmonella spp, сальмонелла.

Видов сальмонелл много, вдаваться в видовые дебри не буду. Сальмонеллез часто ассоциируется с яйцами кур, и действительно является большой проблемой, являясь самым частым возбудителем пищевых инфекций. Вызывают брюшной тиф, паратиф, сальмонеллез, цистит, пиелонефрит.

Все эти бактерии, кроме сальмонеллы, если говорить о контроле качества, ищутся в определенном количестве продукта, чаще всего – их не должно быть в 1 грамме продукта. Сальмонеллы не должно быть в 25 граммах или в 10.

Присутствие одной из этих бактерий говорит о том, что в продукте есть не только эта бактерия, но и другие патогенные, более трудно выделяемые, и такой продукт не проходит контроль качества.

Как же их обнаруживают?

Множество микробиологов изобрели, и до сих пор изобретают питательные среды для выделения конкретных видов микроорганизмов.

Питательные среды делятся по одной из классификаций на сохраняющие (трансферные, в которых микроорганизмы доставляются), обогащающие (если в грамме продукта была одна колония, то эта среда даёт ей размножится, и обнаружить её невооружённым глазом), культивирования (просто на ней все растут), среды выделения определенных видов, идентификации (дифференциальные, селективные).

Среды бывают плотные, в их состав добавлен агар, по консистенции напоминают желе или мармелад, в составе могут быть добавлены разные химические соединения, ингибирующие рост одних видов, и дающие возможность расти другим.

Бывают жидкие, без агара, с теми же функциями по части селективности.

Во многие среды добавляется краситель, дабы в ходе реакции выделяемого микроорганизмом соединения, краситель среагировал с ним и изменил свой цвет. Это видно на картинке к золотистому стафилококку, изначально эта среда красная.

Самые первые среды, на которые попадает продукт это накопительные, обогащающие и среды культивирования. Наука не стоит на месте, методики меняются, я не рискну расписывать все новые методы, пройду по тем, что используется чаще всего, и с чем работаю сама. Оговорюсь заранее, номерные среды – фишка фармакопеи, названия и именные среды используются во всех других отраслях.

Питательная среда N1. Другие варианты – мясо-пептонный агар, соево-казеиновый агар, ГРМ N1 или просто среда для культивирования микроорганизмов. Самая популярная среда, на ней растут все аэробы, используется для подсчета общего количества микроорганизмов. На неё сеют продукт, воду, отбирают воздух и отсевают смывы с оборудования.

Среда N2. Также агар Сабуро. Бывает с дополнениями в виде антибиотиков, глюкозы и др. используется для культивирования плесневых грибов и дрожжей. В остальном – тоже самое, как и первая среда. Антибиотики в неё добавляют, чтобы подавить рост бактерий. Потому что по внешнему виду бактерии иногда не отличить от дрожжей.

Среда N8. Также соево-казеиновая среда. Жидкая. На ней так же растут все, есть особенности роста некоторых видов микроорганизмов, поэтому она так же используется для выделения. Например, псевдомонада растёт на ней пленкой на поверхности, с сине-зелёным отблеском, стафилококк золотистый тонкими нитями в среде, споровые бактерии растут сморщенной пленкой.

R2A агар. Новинка для меня, пришла к нам из Европы, служит для культивирования микроорганизмов при анализе воды.

Не особо питательная, что помогает микробам, живущим в воде, где им нечего жрать, прийти в себя и показать себя во всей красе.

Такие микроорганизмы чаще всего повреждённые и угнетённые, а эта среда для них как куриный бульончик для ослабшего от болезни. Его картинки пока нет, сама сфоткаю на днях))

Пока что все, друзья, мои пальцы померли набирать этот тест на долбанном первом айпаде, фотки все нагло сперты с Интернета, так как пока что мне не предоставился случай сфоткать на работе. Больше всего фото с кишечкой только по той причине, что её проще всего найти 🙂 Но я исправлюсь, и если вам это было интересно, запилю продолжение о используемых средах.

И самое главное: мойте руки после туалета и улицы 🙂

[моё] Контроль качества Микробиология Наука Интересное Длиннопост

Источник: //pikabu.ru/story/mikrobiologiya_i_pitatelnyie_sredyi_4976887

Ваш Недуг
Добавить комментарий