Паппенгейма — Кардоса окраска

Окраска по Паппенгейму — Крюкову

Паппенгейма — Кардоса окраска

Принцип.

Комбинированная окраска фиксатором-красителем Мая–Грюнвальда и краской Романовского, дающая возможность очень хорошо дифференцировать составные части клеток.

Посуда и аппаратура — см. «Окраска по Романовскому».

Реактивы

  • 1. Готовый краситель-фиксатор Мая–Грюнвальда, состоящий из эозин метиленового синего в метиловом спирте.
  • 2. Свежеприготовленный раствор краски Романовского
  • (1–2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды).
  • 3. Нейтральная дистиллированная вода.

При отсутствии готового красителя-фиксатора Мая-Грюнвальда его можно приготовить растворением 0,3-0,5 г сухой краски Мая-Грюнвальда в 100 мл чистого метилового спирта с добавлением (или без него) 50 мл чистого глицерина.

Краситель в обоих случаях созревает 4 дня при комнатной температуре.

Методика.

На нефиксированный мазок наливают пипеткой 10–15 капель готового красителя-фиксатора Мая–Грюнвальда, через 3 мин прибавляют по каплям столько же воды и продолжают окрашивание еще 1 мин, после чего краситель смывают водой и мазок высушивают на воздухе.

Затем на высушенный мазок наливают свежеприготовленный водный раствор красителя Романовского на 8–15 мин в зависимости от температуры в помещении, смывают краску водой и мазок высушивают на воздухе. Этот способ окраски является наилучшим.

Принцип.

Применение специально приготовленного красителя-фиксатора, дающего наиболее четкую окраску зернистости гранулоцитов особенно базофилов.

Посуда и аппаратура.

  • 1. Стеклянные колбы емкостью 250 и 1000 мл.
  • 2. Аппарат Коха.
  • 3. Воронки.
  • 4. Измерительный цилиндр емкостью 500 мл.
  • 5. Штатив для мазков.
  • 6. Мостик для окраски с кюветой.

Реактивы.

Краситель-фиксатор: 1% раствор медицинского метиленового синего на 0,5% водном растворе двууглекислого натрия наливают в сосуд так, чтобы высота слоя не превышала 6 см, и нагревают в аппарате Коха при 100° в течение часа с момента образования пара. Затем жидкость охлаждают и фильтруют. Фильтрат при искусственном освещении в тонком слое должен иметь пурпурно-красный оттенок.

К 100 мл фильтрата прибавляют 500 мл 0,1% водного раствора эозина (желтого, водорастворимого). При смешении обеих жидкостей тотчас же образуется обильный осадок, который отфильтровывают и высушивают. Полученный краситель растворяют в чистом метиловом спирте в соотношении 0,1 : 60.

Методика.

На сухой нефиксированный мазок наливают несколько капель краски, спустя 1 мин прибавляют столько же капель дистиллированной воды. Через 2–3 мин препарат промывают в воде (около полминуты), пока он в тонком слое не приобретает розового оттенка.

Page 3

Принцип.

Использование большего­ объема крови с целью улучшения условий обнаружения в крови малярийных плазмодий, спирохет возвратного тифа, эозинофилов и полихроматофилов.

Посуда и аппаратура.

  • 1. Предметные стекла.
  • 2. Мостик для окраски с кюветой.
  • 3. Штатив для сушки мазков.

Реактивы.

  • 1. Краска Романовского.
  • 2. Дистиллированная вода.

Методика.

Приготовляют обычный мазок крови и на толстые места его наносят отдельно две большие капли крови. Каждую каплю концом иглы или углом другого стекла размазывают до величины двух- или трехкопеечной монеты и сушат на воздухе.

Мазок до нанесения толстых капель и после не фиксируют, а наливают на него на несколько минут дистиллированную воду для извлечения гемоглобина. Окрашенную гемоглобином воду затем осторожно сливают и на препарат наливают разведенную, как обычно, краску Романовского на 20–30 мин. После окраски препарат осторожно промывают водой, чтобы не смыть каплю, и высушивают на воздухе.

Больший объем крови, чем в мазках, и гемолиз эритроцитов позволяют легче обнаружить в крови малярийные плазмодии, спирохеты возвратного тифа, а также эозинофилы и полихроматофилы.

При хорошей фиксации и окраске любым из приведенных выше способов ядра лейкоцитов окрашиваются в вишнево-красный цвет с хорошо видимой структурой хроматина,

ядрышки — в синевато-голубоватый или в светло-фиолетовый,

цитоплазма нейтрофилов — в светло-розовый,

лимфоцитов — в чистый сине-голубой,

моноцитов — в серо-голубой или дымчатый,

зернистость нейтрофильная — в красновато-фиолетовый,

эозинофильная — в оранжево-красный,

базофильная — в темно-фиолетовый или темно-серый,

азурофильная — в вишнево-красный,

эритроциты — в бледно-розовый цвет.

Клиническое значение.

Приведенные методы окраски дают возможность дифференцировать вид клеток, особенности структуры их ядер и цитоплазмы и патологические изменения в них.

Источник: //vuzlit.ru/894884/okraska_pappengeymu_--_kryukovu

Ваш Недуг
Добавить комментарий