Коли-индекс, коли-титр

Тема 12. Санитарно-микробиологическое исследование воды. Определение коли-титра и коли-индекса воды

Коли-индекс, коли-титр

Вода является естественной средой обитания многих микроорганизмов. Особую опасность для здоровья человека и животных представляют патогенные бактерии, которые могут содержаться в ней.

Источниками загрязнения воды патогенными микроорганизмами являются выделения больных животных и людей, трупы животных, сточные воды, особенно с предприятий, перерабатывающих животное сырье и др.

Длительность выживания патогенных микробов в воде зависит от их вида, условий окружающей среды и может составлять от нескольких часов до нескольких лет. Так, возбудитель сибирской язвы может сохраняться в воде до 3 лет, возбудитель туберкулеза — до 1 года, возбудитель бруцеллеза — до 100 дней.

Имеется группа болезней, для которых характерен водный путь распространения (паратифы, лептоспирозы).

Таким образом, вода может стать источником распространения инфекционных болезней, возникновения эпидемий и эпизоотий. Для санитарно-бактериологической оценки воды проводят следующие исследования:

1) определение количества МАФАнМ в 1 мл;

2) определение коли-титра (КТ) и коли-индекса (КИ);

3) обнаружение в воде патогенных микроорганизмов проводят по эпидпоказаниям. Для санитарно-микробиологического исследования пробы воды отбирают из источника в объеме не менее 500 мл. Из открытых водоемов их набирают батометром.

Батометр — стерильная емкость с пробкой, в металлическом каркасе и со свинцовым грузилом. На нужной глубине пробку открывают, подтягивая ее за веревочку.

Воду из рек, озер отбирают с глубины 10–15 см от поверхности, а при небольшой глубине — на расстоянии 10–15 см от дна.

Для отбора проб водопроводной воды из крана набирают 500 мл в стерильные колбы с ватной пробкой с соблюдением правил асептики.

Кран предварительно стерилизуют горящим спиртовым тампоном, затем в течение 10 мин спускают воду и только потом берут пробы, которые исследуют сразу или не позднее 2 ч с момента взятия.

Если это невозможно, то их хранят не более 6 ч обязательно при температуре +1…+5_С в холодильнике.

Определение количества МАФАнМ в водопроводной воде. В чашку Петри с соблюдением правил асептики вносят 1 мл водопроводной воды без предварительного разведения, заливают расплавленным и охлажденным до температуры +50_С МПА (методом горячей заливки).

Посевы инкубируют 24–48 ч в термостате при температуре +30_С. После указанного срока приступают к подсчету количества колоний, выросших как на поверхности, так и в глубине агара.

Учитывают только те разведения, при посеве которых на чашках вырастает от 30 до 300 колоний.

При посеве воды без разведений количество бактерий в 1 мл воды будет равно количеству выросших колоний. При определении количества МАФАнМ в воде открытых

водоемов исследуемую воду предварительно разводят стериль –1:10-1 до 1 : 10-4, из двух последних разведений вносят по 1 млв стерильные чашки и заливают расплавленным и охлажденным до температуры +50_С МПА.

После инкубирования притемпературе +30_С в термостате в течение 24–48 ч подсчитывают количество колоний, умножают на степень разведения водыи определяют количество бактерий в 1 мл воды открытых водоемов. Учету подлежат чашки Петри, в которых выросло от 30до 300 колоний.

Колонии считают в каждой чашке отдельно,определяют среднеарифметическое число по двум чашкам. Полученное число умножают на степень разведения исследуемойводы и получают число бактерий в 1 мл воды.

Определение коли-титра (КТ) и коли-индекса (КИ) воды.

Колититромназывают наименьший объем воды, в котором обнаружена одна кишечная палочка.

Колииндекспоказывает число кишечных палочек в 1000 мл воды.

Кишечная палочка является постоянным обитателем кишечника человека и животных, следовательно, ее присутствие в питьевой воде является индикатором фекального загрязнения, поэтому она отнесена к санитарно-показательным микроорганизмам.

Чем выше концентрация бактерий группы кишечной палочки, тем вероятнее присутствие в исследуемой воде патогенных бактерий, таких как сальмонеллы, возбудители дизентерии и холеры.

Показатели КТ и КИ указывают на санитарное состояние воды, ее пригодность в качестве питьевой.

Коли-титр и коли-индекс определяют двумя методами:

1) метод бродильных проб;

2) метод мембранных фильтров.

При исследовании чистой воды удобнее пользоваться методом мембранных фильтров. Если вода содержит механическиечастицы, затрудняющие процесс фильтрации, лучше пользоваться бродильным методом.

Метод бродильных проб.Суть этого метода заключается в посеве определенных объемов исследуемой водыв питательные среды накопления с индикатором и поплавками, инкубации ее при температуре +37_С, с последующим пересевом из забродивших пробирок на среду Эндо, дифференциацией выросших колоний и вычислении коли_титра воды по нормативам.

Данный метод основан на ферментативной способности БГКП расщеплять при помощи ферментов лактозу или глюкозу до кислоты и газа.

Исследуемая вода засевается в различных объемах в глюкозопептонную среду с индикатором и поплавками, при наличии кишечной палочки появляется помутнение, меняется цвет индикатора (желтый цвет переходит в красный) и появляются пузырьки газа в поплавках. Воду методом бродильных проб исследуют в три этапа (три дня):

Первый день.Засевают водопроводную воду в объеме 333 мл (три объема по 100 мл, три — по 10 мл и три — по 1 мл).

При этом вода в объемах по 100 и 10 мл засевается в колбы и пробирки соответственно — с 10 и 1 мл концентрированной ГПС, а посев воды в объеме 1 мл— в пробирки с 10 мл среды с нормальной концентрацией (готовят как концентрированную, но количество всех ингредиентов, кроме воды, уменьшают в 10 раз). Посевы исследуемой воды в средах ГПС культивируют в термостате 24 ч при температуре +37_С.

Второй день.Ведется учет результатов посева разных объемов воды, при котором:

-отсутствие помутнения, образования кислоты и газа в колбах и пробирках после посева воды свидетельствуют об отсутствии кишечной палочки в исследуемом объеме воды;

-помутнение питательной среды, изменение цвета индикатора на красный и появление газа в поплавках говорят о наличии кишечной палочки. Из каждого забродившего посева петлей делают пересев штрихом на агар Эндо, разделенный на сектора в чашках Петри, таким образом, чтобы появились изолированные колонии. Посевы культивируют 24 ч при температуре +37_С.

Третий день.Ведется учет результатов посева на агаре Эндо, при котором:

-отсутствие роста на агаре Эндо или наличие колоний, не характерных для БГКП, говорит о том, что кишечной палочки в посевах нет;

-из колоний, характерных для бактерий БГКП (красных с металлическим оттенком), готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют.

Идентифицируют культуру по оксидазному тесту, положительную реакцию на этот тест дают БГКП, которые не учитываются.

Наличие в мазках грамотрицательных бактерий с отрицательной реакцией на оксидазный тест позволяет дать положительный ответ на присутствие БГКП в исследуемом объеме воды.

Для установления свежего фекального загрязнения делают посев воды в желчно-лактозную среду с бриллиантовым зеленым. Посевы культивируют при температуре +43_С для дифференциации кишечной палочки от хладнокровных, не растущих при такой высокой температуре. Наличие мути и газа указывает на присутствие в воде бактерий — показателей свежего фекального загрязнения.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Источник: //studopedia.ru/11_86035_tema--sanitarno-mikrobiologicheskoe-issledovanie-vodi-opredelenie-koli-titra-i-koli-indeksa-vodi.html

32. Санитарно – показательные микроорганизмы. Коли – титр, коли – индекс, методы определения

Коли-индекс, коли-титр

Санитарно-показательныминазывают микроорганизмы, по которымможно косвенно и с еще большей степеньювероятности судить о возможном присутствиипатогенов во внешней среде.

Ихналичие свидетельствует о загрязненииобъекта выделениями человека и животных,так как они постоянно обитают в тех жеорганах, что и возбудители заболеваний,и имеют общий путь выделения в окружающуюсреду.

Например, возбудители кишечныхинфекций имеют общий путь выделения (сфекалиями) с такими санитарно-показательнымибактериями, как бактерии группы кишечнойпалочки —(в группу входят сходные посвойствам бактерии родов Citrobacter,Enterobacter, Klebsiella), энтерококки, клостридииперфрингенс.

Возбудители воздушно-капельныхинфекций имеют общий путь выделения сбактериями (кокками), постоянно обитающимина слизистой оболочке верхних дыхательныхпутей, выделяющимися в окружающую среду(при кашле, чиханье, разговоре), поэтомув качестве санитарно-показательныхбактерий для воздуха закрытых помещенийпредложены гемолитические стрептококкии золотистые стафилококки.Санитарно-показательныемикроорганизмы должны отвечать следующимосновным требованиям:

1.должны обитать только в организме людейили животных и постоянно обнаруживатьсяв их выделениях;

2.не должны размножаться или обитать впочве и воде;

3.сроки их выживания и устойчивость кразличным факторам после выделения изорганизма в окружающую среду должныбыть равными или превышать таковые упатогенных микробов;

4.их свойства должны быть типичными илегко выявляемыми для их дифференциации;

5.методы их обнаружения и идентификациидолжны быть простыми, методически иэкономически доступными;

6.должны встречаться в окружающей средев значительно больших количествах, чемпатогенные микроорганизмы;

7.в окружающей среде не должно быть близкосходных обитателей — микроорганизмов.

Коли-индекс— количество особей кишечной палочки,обнаруживаемое в 1 л (для твердых тел в1 кг) исследуемого объекта; определяетсяпутем подсчета колоний кишечной палочки,выросших на плотной питательной средепри посеве определенного количестваисследуемого материала, с последующимпересчетом на 1 л (кг). Коли-индекс —величина, пропорциональная фактическомусодержанию кишечной палочки в исследуемомсубстрате.

Коли-титр— это наименьшее количество исследуемогоматериала в миллилитрах (для твердыхтел — в граммах), в котором обнаруженаодна кишечная палочка. Для определенияколи-титра раздельно засевают на жидкиесреды десятикратно уменьшающиеся объемыисследуемого материала (например, 100;10; 1; 0,1; 0,01; 0,001 мл).

Дляперевода коли-титра в коли-индекс следует1000 разделить на число, выражающееколи-титр; для перевода коли-индекса вколи-титр 1000 разделить на число, выражающееколи-индекс.

33.Микрофлора тела человека в различныевозрастные периоды. Роль микробов –постоянных обитателей тела человека вфизиологических процессах. Понятие одисбактериозе, его классификация,проявления и методы лечения.

Микрофлорарасполагается только на коже и наслизистых оболочках полостей, сообщающихсяс внешней средой (кроме матки и мочевогопузыря). Все ткани организма в нормесовершенно свободны от микробов.

Естественнаяаутомикрофлора тела— единый природныйкомплекс, состоящий из совокупностигетерогенных микробоценозов в различныхучастках человеческого организма.

Дорождения организм человека стерилен,—в утробе матери эмбрион защищен отвторжения микробов плацентарным идругими барьерами.

Микрофлорапищеварительного тракта — самаямногочисленная и самая значимая дляподдержания здоровья человека. Особенновелика ее роль в развивающемся детскоморганизме.

Существуетдва критических момента в процессеформирования кишечного микробиоценоза.Первый — при рождении ребенка, когда втечение первых суток начинаетсяколонизация стерильного кишечника,второй — когда ребенка отлучают отгрудного вскармливания.

Входе родов кожа и слизистые ребенкавпервые соприкасаются с микрофлоройродовых путей матери, воздуха, рукмедицинского персонала.

Вследствиеэтого кишечная микрофлора первых днейжизни ребенка представлена ассоциациейаэробов (в основном факультативнымианаэробами) — микрококками, энтерококками,клостридиями, стафилококками.

К 4-5-мудню жизни видовой состав фекальноймикрофлоры становится более разнообразным,появляются ассоциации неспорообразующиханаэробов (бифидобактерии, пропионибактерии,пептококки, пептострептококки, бактероидыи фузобактерии). Однако пока еще доминируютаэробные бактерии — лактобациллы,кокки, дрожжевые грибки.

Дальнейшееформирование аутомикрофлорыжелудочно-кишечного тракта в основномзависит от типа вскармливания.

При грудном вскармливанииу здоровыхдоношенных детей уже в конце первой —начале второй недели жизни в микробоценозетолстого кишечника за счет опережающихтемпов роста отчетливо преобладает анаэробная составляющая (более 95%).

Оставшаяся часть (около 4-5% ) представленаразнообразными факультативными аэробами:лактобациллами, эшерихиями, энтерококками,эпидермальным стафилококком, дрожжевымигрибками.

Рольмикробов – постоянных обитателей телачеловека в физиологических процессах

Микробныебиоценозы поддерживают нормальныефизиологические функции и играютопределённую роль в иммунитете. Нарушенияв микробных биоценозах во многих случаяхмогут привести к возникновениюпатологических процессов в соответствующихорганах.

Важнуюроль играет микрофлора толстой кишки.Она обладает выраженными антагонистическимисвойствами (особенно анаэробные микробы)и препятствует развитию патогенныхбактерий, которые могут попасть с пищейи водой в кишечник, а также гнилостныхбактерий.

Микробы – постоянные обитателикишечника образуют бактериоцины,антибиотики, молочную кислоту, спирты,перекись водорода, жирные кислоты,которые подавляют размножение патогенныхвидов.

Таким образом, анаэробы кишечникаучаствуют в обеспечении колонизационнойрезистентности, так как предотвращаютколонизацию (заселение) слизистыхоболочек посторонними микроорганизмами.

Микробыкишечника также участвуют в процессахпищеварения, водно-солевом, белковом,углеводном, липидном обменах, образуютна слизистой оболочке кишечника защитнуюплёнку, способствуют формированию иразвитию иммунной системы, участвуютв обезвреживании токсических соединений,синтезируют биологически активныевещества (витамины, антибиотики,бактериоцины).

Большоезначение имеет E. сoli, которая обладаетвысокой ферментативной активностью,синтезирует витамины B1, B2, B12, B5, K, обладаетантагонистическими свойствами противпатогенных представителей семействаEnterobacteriaceae, против стафилококков и грибовp. Candida.

Понятиео дисбактериозе, его классификация,проявления и методы лечения.

Дисбактериоз(дисбиоз)– это состояние, развивающееся врезультате утраты нормальных функциймикрофлоры. При этом происходит нарушениесложившегося равновесия между видамимикробов, а также между ними и организмомчеловека, т.е. нарушается состояниеэубиоза.

При дисбактериозе происходяткачественные и количественные изменениябактериальной микрофлоры. При дисбиозе– изменения и среди других микроорганизмов(вирусов, грибов). Дисбактериозы вызываютразличные эндогенные (внутренние) иэкзогенные (внешние) факторы.

Чаще всегоразвиваются дисбактериозы кишечника.

Виддисбактериоза по возбудителю:

  • стафилококковый
  • протейный
  • дрожжевой
  • ассоциированный (стафилококковый, протейный, дрожжевой)

Постепени компенсации:

  • компенсированная — клинических проявлений может не быть;
  • субкомпенсированная — проявления дисбактериоза иногда возникают при диетических нарушениях, например;
  • декомпенсированная — приспособительные механизмы истощены, вылечить дисбактериоз трудно.

Лечениезаключается в восстановлении нормальноймикрофлоры. Для восстановления нормальноймикрофлоры применяются пробиотики.

Пробиотики– это живые микроорганизмы или вещества,которые нормализуют состав и функциимикрофлоры в организме.

Кпробиотикам относятся:

1)эубиотики– препараты, содержащие живые (лиофильновысушенные) микроорганизмы (чащепредставители нормальной микрофлоры,обладающие выраженными антагонистическимисвойствами). Они могут быть монокомпонентными(монокультуры) и поликомпонентными.

2)Пребиотики– вещества немикробного происхождения,компоненты убитых микробных клеток и/или их метаболиты:

3)Синбиотики– содержат как живые микроорганизмы,так и неклеточные стимуляторы ростанормальной микрофлоры: нутролин В(лактобациллы + витамины), ацидофилюс,примадофилюс, мальтидофилюс, бебилайф.

Источник: //studfile.net/preview/2783074/page:21/

Коли-индекс, коли-титр

Коли-индекс, коли-титр

Коли-индекс, коли-титр вЂ” количественные показатели фекального загрязнения РІРѕРґС‹, пищевых продуктов, почвы Рё РґСЂСѓРіРёС… объектов окружающей среды, основанные РЅР° исследовании содержания РІ РЅРёС… кишечной палочки.

Она является индикатором фекального загрязнения, т.к. относится к постоянным обитателям кишечника человека, в значительном количестве выделяется с фекалиями в окружающую среду, где длительно сохраняется.

Кроме того, кишечная палочка легко выращивается в обычных условиях на простых питательных средах. Присутствие ее в исследуемых субстратах указывает на возможность наличия в них других, в т.ч.

патогенных для человека микроорганизмов кишечной группы, непосредственное обнаружение которых затруднено.

Высокое содержание кишечной палочки в тех иди иных субстратах может свидетельствовать об интенсивном фекальном загрязнении и повышает эпидемиологическую опасность этих субстратов.

Поэтому питьевая вода и различные пищевые продукты подвергаются постоянному санитарно-бактериологическому контролю, предусматривающему определение коли-титра или коли-кидекса.

В В В  Коли-индекс вЂ” количество кишечных палочек, обнаруживаемое РЅР° 1 Р» жидкости, 1 РєРі твердого вещества (для пищевых продуктов) Рё РІ 1 Рі почвы.

Для определения коли-индекса используют метод мембранных фильтров или непосредственный посев различных количеств исследуемого материала на плотные питательные среды.

Сущность метода мембранных фильтров заключается РІ фильтровании определенных объемов исследуемой жидкости (или твердого вещества, разведенного РІ РІРѕРґРµ) через мембранные фильтры в„–2 РёР»Рё в„–3, РЅР° которых задерживаются бактерии. Фильтры переносят РЅР° чашки СЃРѕ средой Р­РЅРґРѕ, инкубируемые РїСЂРё tВ° 37В°, Р° затем исследуют выросшие РЅР° поверхности фильтра темно-красные СЃ металлическим блеском, розовые Рё прозрачные колонии. Р�Р· колоний каждого типа готовят мазки Рё окрашивают РёС… РїРѕ Граму. Колонии разных типов проверяют РЅР° оксидазную активность, которая должна быть отрицательной. Бесцветные Рё розовые колонии дополнительно засевают РЅР° полужидкую среду СЃ глюкозой Рё индикатором, РЅР° которой РІ течение 24-часовой инкубации РїСЂРё tВ° 37В° должны образовываться кислота Рё газ. Для определения коли-индекса подсчитывают выросшие РЅР° фильтре колонии кишечной палочки Рё затем РїСЂРѕРІРѕРґСЏС‚ перерасчет РЅР° 1 Р», 1 РєРі или 1 Рі РІ зависимости РѕС‚ исследуемого материала.

В В В  Коли-титр вЂ” наименьшее количество жидкости или твердого вещества (выраженное соответственно РІ миллилитрах или граммах), РІ котором обнаруживаются кишечные палочки.

В В В  Коли-титр определяют бродильным методом, заключающимся РІ посеве определенных объемов исследуемого субстрата РЅР° среды накопления (глюкозопептонную или лактозопептонную СЃ индикатором Рё поплавком Рё РґСЂСѓРіРёРµ подобные среды), которые выдерживают tВ° 37В°. Большие объемы засевают РЅР° концентрированную среду, малые объемы вЂ” РІ РїСЂРѕР±РёСЂРєРё СЃРѕ средой нормальной концентрации. Р�Р· всех помутневших РїСЂРѕР±РёСЂРѕРє РІРЅРµ зависимости РѕС‚ образования кислоты Рё газа делают высевы РЅР° среду Р­РЅРґРѕ СЃ последующей индентификацией выросших колоний.

    Ориентировочно за коли-титр принимают тот наименьший объем, при посеве которого на среды накопления выявлены кишечные палочки.

Наиболее вероятное значение коли-титра воды, молока, пива и др. определяют с помощью специальных таблиц, сопоставляя с ними полученные результаты.

В целом бродильный метод менее точен, чем учет выросших бактерий на плотных средах и мембранных фильтрах.

В В В  Коли-титр вЂ” величина, обратная коли-индексу, который является прямым показателем фекального загрязнения. Возможен пересчет коли-титра РЅР° коли-индекс Рё обратно.

Предельно допустимые величины коли-титра (коли-индекса) нормированы общесоюзным стандартом или республиканскими техническими условиями, а также специальными инструкциями органов здравоохранения и других ведомств.

    Для получения более точных данных о наличии фекального загрязнения объектов и его степени считается целесообразным наряду с определением коли-титра (коли-индекса) проводить одновременный количественный учет в исследуемом материале и других санитарно-показательных микроорганизмов (например, протея, энтерококков, споровых анаэробов, кишечных бактериофагов).

    См. также Вода, Пищевые продукты, Почва.

Источник: //www.nedug.ru/library/%D0%B1%D0%B0%D0%BA%D1%82%D0%B5%D1%80%D0%B8%D0%BE%D0%BB%D0%BE%D0%B3%D0%B8%D1%87%D0%B5%D1%81%D0%BA%D0%B8%D0%B5_%D0%BC%D0%B5%D1%82%D0%BE%D0%B4%D1%8B/%D0%9A%D0%BE%D0%BB%D0%B8-%D0%B8%D0%BD%D0%B4%D0%B5%D0%BA%D1%81-%D0%BA%D0%BE%D0%BB%D0%B8-%D1%82%D0%B8%D1%82%D1%80

Определение коли – титра и коли – индекса

Коли-индекс, коли-титр

Кишечная палочка— самый многочисленный и постоянный обитатель толстого отдела кишечника человека и всех тепло­кровных животных.

Она выделяется во внешнюю среду с фекальными массами, поэтому используется как индикатор фекального загрязнения внешней среды и косвенный показа­тель наличия в воде болезнетворных микробов — возбудителей кишечных инфекций человека, выделяемых с фекалиями в во­ду и другие объекты.

Таким образом, кишечная палочка служит санитарно-показательным микроорганизмом воды.

Поскольку она не образует спор и гибнет при относительно щадящих методах обеззаражи­вания, её присутствие в консервированных продуктах или воде указывает на нарушение режима консервирования и на недо­статочность обработки воды, так как если кишечная палочка сохранила жизнеспособность, значит, могли выжить и другие неспорообразующие бактерии, такие, как дизентерийная шигелла, брюшнотифозная сальмонелла и другие патогенные бактерии — возбудители желудочно-кишечных заболеваний.

Коли-индекс (индекс кишечной палочки)— эточисло ки­шечных палочек, обнаруженных и 1 л исследуемой воды (по международным стандартам — в 100 мл).

По существующим нормативам коли-титр питьевой воды не должен быть менее 333 мл (в Москве — не менее 500 мл), а коли-индекс — не более 3 (см. 15.1.4.).

Коли-титр определяют методами бродильных проб.Дан­ные методы основаны на способности кишечной палочки теп­локровных животных и человека развиваться при повышенных температурах (43—44 °С) и сбраживать сахара (маннит, глюко­зу и др.) с выделением газа. Существуют двух- и трехэтапные бродильные методы.

Трехэтапный бродильный метод заключается в следую­щем. На первом этапе ставят первую бродильную пробу: различные разведения исследуемой воды при помощи стериль­ных пипеток вносят в колбы и пробирки со специальными уг­леводными жидкими средами (среда Булира, среда Эйкмана, розоловая и др.) и поплавками.

В зависимости от предполагаемого микробного загрязне­ния водоисточника применяют разные схемы посева. Так, при исследовании водопроводной воды делают посевы в общем объеме 300 мл (2 объема по 100 мл и 10 объемов по 10 мл). При исследовании воды открытых водоемов (речной, озерной и т. д.

) не­обходимо посеять воду в общем объеме 111,1 мл (1 объем — 100 мл; 1 объем — 10 мл и по одному объему в 1 мл и 0,1 мл). Соотношение между средой и засеваемой водой должно быть 1 : 2.

Поэтому посевы малых количеств воды (1 мл, 0,1 мл) выполняют в пробирки с разведенной средой (обычной концентрации), а большие объемы воды (100 мл и 10 мл) — в концентрированную среду.

Посевы выращивают в термостате при 43—44 °С в тече­ние 24 ч. При указанной температуре подавляется развитие микроорганизмов, не имеющих санитарно-показательного зна­чения для воды. Затем просматривают посевы для выявления признаков роста кишечной палочки (наличие пузырьков газа в поплавках, изменение цвета, помутнение).

На втором этапе для подтверждения правильности обнаружения роста кишечной палочки в жидкой среде из посе­ва с признаками роста при помощи бактериальной петли дела­ют высев в чашки Петри со средой Эндо и выращивают куль­туру при 37 °С 24 ч.

Среда Эндо состоит из МПА, лактозы и обесцвеченного индикатора (фуксин обесцвечен сульфитом натрия).

На данной среде бактерии группы кишечной палочки теплокровных жи­вотных образуют типичные темно-красные, ярко-красные или розовые колонии с темным центром, имеющие металлический блеск или без него.

Столь характерный рост на среде Эндо этих бактерий обусловлен тем, что они активно сбраживают лактозу, продукты расщепления которой вызывают восстановление ин­дикатора фуксина, окрашивающего колонии. При отсутствии характерного роста на пробу дают отрицательный ответ.

При наличии типичных колоний из них делают мазки, которые окрашивают по Граму и микроскопируют. Если в мазках обнаруживают мелкие неспорообразующие грамотрицательные палочки, то переходят к третьему этапу для оконча­тельного подтверждения результатов исследования.

На третьем этапе из типичных колоний, в которых при микроскопировании обнаружены характерные микробные клетки, делают пересев в разведенную жидкую углеводную сре­ду (Булира, Эйкмана и др.). Посевы выращивают при 43— 44 °С в течение 24 ч, после чего учитывают окончательно.

При наличии в посевах помутнения, газообразования и изменения цвета дают положительный ответ, результаты которого выражают в виде коли-титра. При отсутствии газообразования даёт­ся отрицательный ответ, т. е. данные первой бродильной пробы подтверждаются.

Коли-индекс определяют методом мембранных фильтров. Для этой цели используют мембранные фильтры № 3 (ультра­фильтры) — пористые пленки, изготовленные из микроклет­чатки (нитроцеллюлозы), с диаметром пор 0,7 мкм.

Перед фильтрацией их подвергают стерилизации двойным кипячени­ем в дистиллированной воде в течение 15—20 мин. Затем сте­рильным пинцетом фильтры помешают на предварительно профламбированную поверхность фильтровального прибора Зейтца.

Через фильтр Зейтца проводят фильтрацию под ваку­умом определенного количества исследуемой воды (через один мембранный фильтр — не более 100 мл воды).

По окончании фильтрации освобождают фильтроваль­ную пластинку, частично разбирая прибор. При помощи сте­рильного пинцета фильтр кладут осадком вверх на поверхность среды Эндо, залитой в чашку Петри, плотно прижимая к сре­де. В одну чашку можно поместить 4—5 фильтров.

После куль­тивирования в термостате при 37 °С в течение 18—24 ч подсчи­тывают выросшие на фильтре колонии, характерные для груп­пы кишечной палочки.

Из 2—3 колоний, типично окрашенных и бесцветных, берут материал для мазков, окрашивают их по Граму и микроскопируют с иммерсионным объективом.

Если в мазках присутствуют мелкие грамотрицательные неспорообразующие палочки, из оставшейся части колонии де­лают пересев в пробирки с небольшим объемом жидкой угле­водной среды (среда Булира или др.). Посевы выращивают при 43—44 °С в течение 24 ч. Наличие газообразования — последний показатель присутствия бактерий группы кишечной палочки.

Источник: //studopedia.su/5_48864_opredelenie-koli---titra-i-koli---indeksa.html

Ваш Недуг
Добавить комментарий