Коха аппарат

Стерилизации и других микробиологических целей

Коха аппарат

Термостат – прибор для поддержания постоянства температуры – применяют для выращивания культур микроорганизмов. Он представляет собой шкаф (рисунок 1), в котором поддерживается в течение длительного времени определенная температура. Оптимальная температура для размножения многих микроорганизмов 37 ºС. Термостаты бывают суховоздушными и водяными.

Сушильный шкаф (печь Пастера) используют для стерилизации сухим жаром посуды, инвентаря и сухих материалов, например крахмала, мела (рисунок 2). Стерилизуемый материал предварительно заворачивают в бумагу и помещают в шкаф так, чтобы он не касался стенок.

Стерилизацию проводят при температуре 160 ºС в течение двух часов. Поднимать температуру выше 180 ºС не рекомендуется: ватные пробки и бумага начинают разрушаться (буреют, становятся ломкими).

Простерилизованный материал вынимают после отключения и охлаждения шкафа, лучше, когда температура в шкафу сравняется с комнатной.

Прибор для счета колоний(рисунок 3) – полуавтоматический счетчик, снабженный электропером с пружинным устройством, предназначенный для счета колоний бактерий в чашках Петри. Чашку
Петри с колониями бактерий устанавливают вверх дном на растровое стекло.

Легкий нажим электропера на участке дна чашки Петри, соответствующем положению колонии, оставляет на стекле метку. При этом держатель поднимается вверх, цепь замыкается, и показания счетчика увеличиваются на единицу.

Отсчет количества колоний бактерий производится путем вычисления разности показаний импульсного счетчика до начала отсчета и после его окончания.

Автоклав (рисунок 4) – толстостенный аппарат, предназначенный для стерилизации посуды и питательных сред паром под давлением. Это герметичный котел с двойными металлическими стенками и крышкой. Пространство между стенками (водопаровая камера) заполняется водой.

Внутренняя часть (стерилизационная камера) снабжена манометром, предохранительными клапанами и краном для спуска воды и пара. Для создания герметичности автоклав плотно закрывается крышкой с резиновой прокладкой.

Применяют для стерилизации питательных сред под давлением от 0,5 до 1,0 МПа в течение 20…30 минут.

1 – корпус; 2 – термометр; 1 – крышка; 2 – корпус;

3 – дверца; 4 – потенциометр; 3 – редуктор; 4 – блок управления;

5 – тумблер; 6 – лампа; 5 – маркировка; 6 – термометр

7 – вентиляционные отверстия

Рисунок 1 – Термостат Рисунок 2 – Сушильный шкаф

1 – столик для чашки Петри; 2 – перо с пружинным устройством;

3 – показатель счетчика; 4 – тумблер для включения импульсного счетчика; 5 – тумблер для включения лампы освещения счетчика

Рисунок 3 – Прибор для счёта колоний микроорганизмов

1 – стерилизационная камера; 2 – кран для выхода воздуха;

3 – манометр; 4 – предохранительный клапан;

5 – водопаровая камера; 6 – воронка для заполнения автоклава водой;

7 – отверстия для поступления пара в стерилизационную камеру;

8 – крышка; 9 – подставка для размещения стерилизуемых материалов

Рисунок 4 – Горизонтальный (а) и вертикальный (схема) (б) автоклавы

1 – крышка; 2 – дно

Рисунок 5 – Чашка Петри

Холодильникииспользуются в микробиологических лабораториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, сывороток и прочих биологически активных препаратов при температуре около 4 ºС. Для сохранения биопрепаратов при температуре ниже 0 ºС используются низкотемпературные холодильники, в которых поддерживается температура минус 20 ºС и ниже.

Аппарат Коха применяют для стерилизации питательных сред, разрушающихся при температуре выше 100 ºС. Он представляет собой металлический полый цилиндр с двойным дном и конусообразной крышкой, которая имеет отверстие для выхода пара. Аппарат покрыт теплоизолирующим материалом (асбестом или линолеумом).

Сосуды с питательными средами ставят на подставку с отверстиями, находящуюся внутри аппарата неплотно, чтобы обеспечить возможность наибольшего контакта их с паром. Обработка стерилизуемого материала в аппарате Коха производится в течение трех дней по 30 минут ежедневно.

В перерывах между стерилизацией среду помещают на двадцать четыре часа в термостат при 28…30 ºС.

Центрифугиприменяются для осаждения микроорганизмов и других клеток, для разделения неоднородных жидкостей (эмульсии, суспензии). В основе метода центрифугирования лежит принцип отделения крупных частиц с большей плотностью при низких скоростях. При повышении скорости центрифуг можно осадить все более мелкие частицы.

Микроанаэростат – аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях.

4.2 Посуда и инструменты, применяемые
в микробиологической лаборатории

Выращивают микроорганизмы в стеклянной посуде: пробирках, колбах или чашках Петри. В пробирках микроорганизмы культивируют как в жидких, так и на плотных средах. Жидкой средой для аэробных культур заполняют обычно пробирки, для анаэробных – .

При выращивании микроорганизмов в колбах используют только жидкие питательные среды.

Для культивирования аэробных микроорганизмов среду наливают тонким слоем (например, 30 мл в колбы Эрленмейера на 100 мл), для выращивания анаэробных микроорганизмов колбу заполняют на . Пробирки и колбы также используют для хранения питательных сред.

Чашки Петри (рисунок 5) применяют для выращивания культур микроорганизмов на плотных питательных средах. Они имеют высоту около 1,5 см и диаметр около 8…10 см (диаметр крышки несколько больше, чем диаметр нижней чашки).

При помощи пипеток проводят пересев жидких культур микроорганизмов. Бродильные трубки используют для определения активности брожения по газообразованию.

Для работы с микроорганизмами используют специальные бактериологические иглы, петли и шпатели (рисунок 6). Их изготавливают из платиновой проволоки, которую закрепляют в специальных металлических держателях или впаивают в стеклянные палочки. Толщина игл и петель не должна превышать 0,5 мм, шпателя – 1,5 мм и более.

При посевах (и пересевах) культур микроорганизмов из колоний, выросших на плотных средах, применяются иглы или шпатели. Шпатели также используют для взятия клеток микроорганизмов из колоний, врастающих в субстрат, и для размазывания жидких культур на поверхности плотной питательной среды.

Суспензии микроорганизмов берут петлей.

При приготовлении препаратов микроорганизмов предметные стекла удерживают на весу пинцетами Корнэ или специальными пинцетами-держателями. Сушить препараты целесообразно на верхнем ярусе сушильного металлического столика Коха.

Промывать их удобно на приспособлениях – перекладинах или на так называемых препаратодержателях – параллельно расположенных стеклянных палочках, соединенных резиновыми трубками (длина палочек от 20 до 30 см, трубок от 15 до 20 см).

Палочки устанавливают над фарфоровыми чашками или ваннами.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Источник: //studopedia.ru/6_134378_sterilizatsii-i-drugih-mikrobiologicheskih-tseley.html

Автоклав, аппарата Коха, печь Пастера, термостат, бактериальные фильтры

Коха аппарат

Автоклав  – это металлический цилиндр с двойной стенкой, снаружи покрытый металлическим кожухом. Он герметичес­ки закрывается массивной крышкой с помощью нескольких винтов. На нем установлен манометр с предохранительным клапаном и паро­отводный кран.

Перед стерилизацией в автоклав наливают через воронку с водо­мерным стеклом дистиллированную воду до указанной на кожухе черты. В стерилизующую камеру загружают материал для стерилиза­ции, закрывают плотно крышкой, завинчивают и включают источник нагрева.

При этом пароотводный кран ос­тавляют открытым. Образующийся при кипячении пар проходит между стенками автоклава и через отверстия внутренней стенки попадает в камеру. При нагревании из автоклава через пароотводный кран вначале выходит воздух, а затем пар.

Выход непрерывной струей сухого пара свидетельствует о полном вытеснении воз­духа из автоклава: кран закрывают, и с этого момента в автоклаве начинает постепенно повышаться давление, стрелка на манометре поднимается.

Началом сте­рилизации считается тот момент, когда стрелка манометра достигает нужного дав­ления.

Рис.3

Показание манометра соответствует определенной температуре пара в автоклаве: 0,50 МПа – 112 °С, 0,1 МПа – 120, 0,15 МПа – 127, 0,2 МПа – 134 °С.

Материал в автоклаве чаще всего стерилизуют при 0,1 МПа в течение 20-30 мин. По окончании стерилизации отключают источник нагрева (стрелка манометра постепенно доходит до нуля). После этого открывают пароотводный кран, выпускают остаток пара. Затем осто­рожно отвинчивают крышку и открывают ее. После полного остывания вынимают простерилизованный материал.

В автоклаве можно стерилизовать посуду, инструменты, питатель­ные среды (кроме желатина и сред с углеводами), перевязочный материал и т. п. При работе необходимо соблюдать правила техники безопасности. К работе допускают лиц, имеющих удостоверение на право пользования автоклавом. Исправность автоклава проверяет инспекция котлонадзора.

Аппарат Коха (рис. 4)- это металлический цилиндр, обшитый снаружи материалом (линолеум, асбест), плохо проводящим тепло. На дно наливают воду, а стерилизующий материал помещают сверху на подставку. Аппарат закрывают конической крышкой, в которой имеются отверстия для термометра и выхода пара.

Внизу расположен кран для спуска воды. Стерилизацию проводят текучим паром при 100 °С в течение 30-60 мин. При таком режиме погибают вегетативные клетки спорообразующих и неспорообразующих форм микробов.

Дробная стерилизация (трехкратная) по 30-60 мин в течение трех дней с интервалом 18-20 ч позволяет создать условия для прорастания спор в вегетативные клетки и освободиться от них. В промежутки времени между стерилизацией споры прорастают и при последующем прогрева­нии погибают.

В аппарате Коха стерилизуют те материалы, которые не выдерживают температуру выше 100 °С (желатин, молоко, углеводные среды и др.).

Белковые среды и сыворотку крови, не переносящие температуру 100 °С, стерилизуют дробно при 56-58 °С в водяной бане.

Сушильный шкаф (печь Пастера) (рис. 5) – это металлический двустенный шкаф, покрытый сверху асбестом. В верхней стенке имеются отверстия для термометра и вентиляции.

Нагретый воздух поднимается снизу между стенками и через верхнее отверстие попа­дает внутрь шкафа, где на полках размещен стерилизуемый материал. Стерилизацию проводят сухим жаром при 150 “С в течение 2 ч, при 165-170 °С – 45 мин, при 180 °С – 15 мин.

В печи Пастера стерилизуют стеклянную посуду. После стерилизации шкаф отключают от источни­ка нагрева и открывают только после полного остывания.

Бактериальные фильтры используют для стерилизации жидкости без нагревания. К ним относятся свечи Шамберлана, Берке-фельда и асбестовые фильтры (пластинки) Зейтца.

Фильтровальные свечи (рис. 6) представляют собой полые ци­линдры, изготовленные из мелкопористых веществ: каолина с при­месью кварцевого песка (свечи Шамберлана) и инфузорной земли (свечи Беркефельда).

Свечи Шамберлана имеют различной величины поры, через которые проходят микробы.

Свечи, пропускающие круп­ные бактерии, обозначены буквами L9, L1(bis), L3, средние – L5, L7, самые мелкие – L9, L11, L13 Свечи Беркефельда по пористости обозна­чаются W, N, V (самые крупные поры у свечей с маркой У).

Фильтры Зейтца представляют собой асбестовые пластинки раз­личной величины.

При монтировании прибора для стерилизации пластинку помещают на сетку между металлическими дисками (с отверстием в середине), которые плотно прижимают друг к другу винтами.

Смонтированный фильтр вставляют через пробку в колбу с боковой отводкой (колба Бунзена) и резиновой трубкой, обертывают бумагой и стерилизуют в автоклаве при 120 °С в течение 20-30 мин.

Для фильтрования материала создают разрежение в колбе Бунзе­на, подсоединяя к ней резиновую трубку с разрежающим масляным ручным насосом Комовского или электровакуумным насосом.

Выполнение работы. Микробы культивируют при оптимальных температурных режимах. Для этого в лабораториях используют воз­душные или водяные термостаты.

Термостат (рис. 7) представляет собой металлический шкаф с двойными стенками, между которыми находится слой воды или воздуха. Наружная часть термостата покрыта материалом, плохо проводящим тепло (асбест, линолеум).

Рис. 4, 5, 6.

Внутри термостата расположены полки для размещения посев­ного материала выращиваемых микроорганизмов. Постоянную температуру в термостате поддер­живают с помощью терморегулято­ра, который вмонтирован в верх­нюю крышку термостата.

Устройст­во терморегулятора основано на принципе линейного расширения веществ.

Терморегуляторы пред­ставляют собой сплав каких-либо двух металлов с различным коэффициентом теплового расширения (латунь, цинк) или металлическую “подушку”, наполненную спир­том, смесью спирта и эфира, рту­тью или другими веществами, из­меняющими свой объем при определенной температуре. При нагревании термостата выше установлен­ной нормы металлы расширяются, контакты размыкаются и дальней­ший приток тепла автоматически задерживается. После снижения температуры включается электрический ток и приток тепла возобно­вляется.

Рис.7

Источник: //veterinarua.ru/laboratornye-raboty/474-avtoklav-apparata-kokha-pech-pastera-termostat-bakterialnye-filtry.html

Ваш Недуг
Добавить комментарий