Китта — Тароцци среда

Специальные питательные среды

Китта — Тароцци среда

К концентрированному мясопептонному бульону с pH 7,0-7,2 добавляют 1% глюкозы, предварительно растворив ее в небольшом количестве воды. Все тщательно размешивают, разливают в пробирки и стерилизуют в автоклаве при 116 °С в течение 15 мин.

Сахарный мясопептонный агар

К мясопептонному агару прибавляют 1% глюкозы. Сахар растворяют в небольшом количестве воды и прибавляют к уже готовому расплавленному мясопептонному агару. Агар тщательно перемешивают, разливают по пробиркам, стерилизуют в автоклаве 15-20 мин при 116°С.

Среда Китта-Тароцци – специальная питательная среда для: выращивания анаэробов и накопления токсинов. На дно пробирок кладут мелкие кусочки говяжьей печени, предварительно сваренные и хорошо промытые горячей водой на сите (в противном случае они дают муть). Печень укладывают в пробирки с таким расчетом, чтобы высота слоя была 1-1,5 см.

Содержимое пробирок заливают концентрированным мясопептонным бульоном, в который предварительно введено 1% глюкозы и 0,15% агара. Высота слоя прилитого бульона должна быть 6-7 см, а pH 7,0-7,2. Стерилизуют среду в автоклаве при 120°С в течение 20 мин.

Перед употреблением среду следует прогреть в кипящей водяной бане в течение 20 мин для удаления растворившегося в среде воздуха.

Говяжью печень, так же как и мясную воду, можно готовить впрок. Для этого ее режут кусочками 5х5 см, хорошо промывают холодной водой и варят в эмалированной кастрюле.

Сваренную печень промывают на сите горячей водой, укладывают в стеклянные банки, заливают водопроводной водой, закатывают и стерилизуют в автоклаве 50-60 мин при 120°С. Брать.

Стеклянные банки емкостью более 0,5 л не рекомендуется.

Агар (полужидкий) для трубок Вейона (для культивирования анаэробов)

Агар для трубок Вейона готовят из концентрированного мясопептонного бульона с добавлением 1% глюкозы и 1% агара. Стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С в течение 20 мин.

Среды для выделения гемолитического стафилококка

Глюкозо-солевой агар. К 100 мл мясопептонного агара добавляют 1 г глюкозы и 5 г чистой поваренной соли. Среду готовят впрок, стерилизуют в автоклаве 15-20 мин при 120 °С. Мясопептонный солевой бульон.

Мясопептонный солевой бульон используется для накопления стафилококка. К концентрированному мясопептонному бульону прибавляют от 6 до 7,5% поваренной соли.

Разливают в пробирки и среду стерилизуют в автоклаве 20 мин при 120 °С.

Среды для галофилов и галобов

Для галофилов и галобов готовят обычные мясопептонные среды, но с повышенным содержанием поваренной соли: к средам для галофилов ее обычно прибавляют 10-15%, к средам для галобов – 20%. Твердые агаровые среды готовят с повышенным процентом агара, так как большое содержание соли влияет на желирующую способность агара и питательная среда может не застыть.

Среда для выделения термофильных аэробных бактерий – возбудителей плоскокислой порчи

К мясопептонному агару с 1 % глюкозы и pH 7,0-7,2 добавляют 0,004% бромкрезолпурпура. Среду разливают в пробирки по 10-15 мл и стерилизуют в автоклаве при 120 °С в течение 20 мин. Приготовленная среда должна иметь слабо-фиолетовую окраску.

Печеночный бульон

Печеночный бульон служит для выявления термофильных анаэробов, не образующих сероводорода. 500 г мелко нарезанной говяжьей печени заливают 1 л водопроводной воды, кипятят в течение 1 ч, доводят pH смеси до 7,0-7,2 и кипятят еще 10 мин.

Затем бульон отцеживают через ткань, доводят объем фильтрата до 1 л, добавляют 10 г пептона, 1 г двуфосфорнокислого калия и 1 г растворимого крахмала. Среду фильтруют через бумажный фильтр и еще раз проверяют pH. Он должен быть равным 7,0. Перед розливом на дно пробирок кладут кусочки печени высотой 2,0-2,5 см, а затем наливают печеночный бульон по 6-7 мл в каждую пробирку.

Стерилизуют 20 мин при 120°С. Перед употреблением среду следует нагреть на водяной бане в течение 20 мин для удаления растворенного в жидкости воздуха.

Сульфатный агар

Сульфатный агар является средой для выявления термофильных анаэробов, образующих сероводород.

В состав среды входят следующие компоненты: триптон – 10 г, сернокислый натрий (сульфат натрия) – 1 г, агар – 20 г, вода – 1 л. Реакцию среды необязательно доводить до определенного значения pH.

Перед розливом в каждую пробирку помещают чистую железную пластинку или гвоздь, а затем наливают питательную среду и стерилизуют, как обычно.

Питательная желатина (МПЖ)

К 1 л готового концентрированного мясопептонного бульона прибавляют 150-200 г мелко измельченной желатины. Желатина приготовляется из костей, хрящей, сухожилий различных животных в виде пластинок или тонких листов. По химическому составу это кислый азотистый продукт, состоящий главным образом из белка глутина.

Мясопептонный бульон с добавленной желатиной расплавляют на водяной бане при температуре 80°С, устанавливают pH 7,0-7,2, разливают по пробиркам и стерилизуют в кипятильнике Коха 3 дня подряд по 20 мин. Если желатина дает осадок, среду следует осветлить перед стерилизацией белком куриного яйца.

Расплавленную желатину охлаждают до 50 °С и добавляют на 1 л среды один белок, предварительно взбитый в пену с двойным количеством воды. После тщательного размешивания среду кипятят 10 мин, фильтруют через вату и, разлив в пробирки, стерилизуют, как указано выше.

Питательная желатина используется для определения протеолитической способности микробов.

Источник: //www.spec-kniga.ru/tehnohimicheski-kontrol/osnovy-mikrobiologicheskogo-kontrolya-konservnogo-proizvodstva/pitatelnye-sredy-i-ih-prigotovlenie-specialnye-pitatelnye-sredy.html

Кафедра Микробиологии СПбГПМУ – Питательные среды

Китта — Тароцци среда

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

(для просмотра изображений в полном размере, щелкните по ним правой кнопкой мыши и выберите пункт “ОТКРЫТЬ ИЗОБРАЖЕНИЕ В НОВОЙ ВКЛАДКЕ”)

ПИТАТЕЛЬНЫЙ АГАР используют для выращивания бактерий, содержит гидролизат кильки, экстракт дрожжей, агар, хлорид натрия и дистиллированную воду. Растворяют ингредиенты, кипятят, фильтруют, стерилизуют (120 гр. С 20 минут). Затем разливают в стерильные пробирки или чашки Петри. На чашке с агаром видны разнообразные колонии микробов, выросшие в при посеве воздуха.

СМЕСЬ БАКТЕРИЙ 

На чашке с МПА видны различные колонии бактерий, отличающиеся по цвету, форме, размерам, прозрачности…. Культуральные свойства Escherichia coli: круглые с ровными краями, гладкие, влажные, слизистые, полупрозрачные колонии.

ЖЕЛТОЧНО-СОЛЕВОЙ АГАР ЧИСТОВИЧА – селективная среда, предназначенная для культивирования стафилококков.

Содержит питательный агар, желток куриного яйца, повышенные концентрации хлорида натрия (8-10%), которые не препятствуют размножению стафилококков и обеспечивают элективность среды для данных микробов.

Среда позволяет дифференцировать лецитиназопозитивные стафилококки, вокруг колоний которых образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком.

КРОВЯНОЙ АГАР питательная среда для выявления гемолитических свойств бактерий. К расплавленному остуженному (до 45-50 гр С) питательному агару асептически добавляют 5-10% дефибринированной крови, хорошо перемешивают и сразу же разливают в чашки Петри. Вокруг выросших колоний отчетливо видны прозрачные зоны гемолиза.

СРЕДА ПЛОСКИРЕВА – дифференциально-диагностическая и селективная, способствует лучшему росту некоторых бактерий (возбудители брюшного тифа, паратифов, дизентерий) и подавляет рост других (кишечная палочка и пр.).

Содержит питательный агар с лактозой, бриллиантовым зеленым, солями желчных кислот, минеральными солями и индикатором (нейтральный красный). Лактозонегативные колонии вырастают бесцветными, лактозопозитивные – красными.

На некоторых модификациях среды Плоскирева выявляется еще и способность сальмонелл выделять сероводород: выросшие колонии чернеют.

СРЕДА ЭНДО предназначена для выделения энтеробактерий, обнаружения эшерихий. Состоит из питательного агара, 1% лактозы и индикатора – основного фуксина, обесцвеченного сульфитом натрия.

Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску.

При росте лактозоположительных бактерий их колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные кишечные палочки образуют бесцветные колонии.

СРЕДА ОЛЬКЕНИЦКОГО (ТРЕХСАХРНЫЙ АГАР) предназначена для дифференциации энтеробактерий по способности сбраживать углеводы в присутствии индикатора.

Рост на трехсахарном железосодержащем агаре:

1. Контроль (незасеянная среда)

2. Salmonella серовара Typhimurium 

3. Escherichia coli 

4. Shigella flexneri 

5. Salmonella серовара Typhi

Пептический перевар животной ткани, гидролизат казеина, дрожжевой и мясной экстракты являются источником азотистых веществ, серы, микроэлементов, витаминов группы В и др. Лактоза, сахароза и глюкоза – ферментируемые субстраты. Тиосульфат натрия в сочетании с ионами железа являются индикатором на сероводород, феноловый красный – индикатор рН. 

Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, способствуют образованию многих кислот, изменяющих цвет среды с красного на желтый. Большее количество кислот освобождается в столбике (при ферментации), по сравнению со скошенной частью (окисление). Бактерии образуют также щелочные продукты (в ходе окислительного декарбоксилирования пептона).

Принципиальное значение имеет соотношение глюкоза/лактоза(сахароза) = 1:10. Индикатор феноловый красный становится желтым при значениях рН менее 6,8. При исходном значении рН=7,4 требуется относительно небольшое количество кислот для развития желтого окрашивания среды.

Щелочные продукты могут нейтрализовать небольшое количество кислоты, образуемое в скошенной части при ферментации глюкозы. Таким образом, щелочной (красный) скос и кислый (желтый) столбик указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не ферментирует лактозу и/или сахарозу.

Бактерии, ферментирующие помимо глюкозы лактозу и/или сахарозу, образуют большое количество кислот, которое не может быть нейтрализовано аминами, поэтому скос и столбик будут кислыми (желтыми). Если в ходе ферментации образуется газ, его можно определить по пузырькам и характерным разрывам среды.

Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода, который, взаимодействуя с ионами железа, образует нерастворимый черный преципитат сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде и почернение обычно бывает в зоне столбика.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ К АНТИБИОТИКАМ МЕТОД ДИСКОВ 

Бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар, после чего на его поверхность пинцетом помещают на равномерном расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 0 С в течение суток.

По диаметру зон задержки роста культуры судят о ее чувствительности к соответствующим антибиотикам.

При зоне задержки роста до 15 мм культура расценивается как нечувствительная или низко чувствительная, 15 – 24 мм – средняя чувствительность, 25 мм и более – высокочувствительная.

СРЕДА ВИЛЬСОНА-БЛЕРА

(ЖЕЛЕЗО-СУЛЬФИТНЫЙ АГАР) используется для выделения анаэробных бактерий. Готовится из питательного агара, к которому добавляют 1% глюкозы, хлорид железа и сульфит натрия. Анаэробные клостридии (Clostridium perfringens) образуют на среде колонии черного цвета за счет образования соединений железа с серой.

ВИСМУТ-СУЛЬФИТНЫЙ АГАР селективная среда для выделения сальмонелл. Готовая среда непрозрачна, зеленоватого цвета. Содержит глюкозу, неорганические соли, бриллиантовый зеленый, питательный агар.

Бриллиантовый зеленый и висмут подавляют рост грамположительной флоры и многих энтеробактерий, в том числе шигелл, эшерихий. Сальмонеллы при росте на среде выделяют сероводород, который взаимодействует с солями висмута.

В результате образуются колонии черного цвета с металлическим оттенком на зеленоватом фоне среды.

СРЕДЫ ГИССА дифференциально-диагностические питательные среды для выявления ферментативной активности бактерий (кишечной группы). Содержат 1% пептонную воду, 0,5% раствор определенного углевода (глюкоза, лактоза, мальтоза, манит, сахароза и др.

) и индикатор Андреде (кислый фуксин в растворе NaOH). Среда при рН 7,2-7,4 – бесцветна, при ферментации углеводов приобретает красный цвет .

В пробирки со средой помещают поплавок (небольшая трубочка, один конец которой запаян) для улавливания газообразных продуктов, образующихся при расщеплении углеводов.

СРЕДА КИТТА-ТАРОЦЦИ обеспечивает рост многих спорообразующих и строгих аспорогенных анаэробов. Ее используют для культивирования и хранения клостридий.

Состоит из питательного бульона, 2% глюкозы и кусочков печени или мясного фарша для адсорбции кислорода. Перед посевом среду прогревают на кипящей водяной бане в течение 10-15 минут для удаления воздуха.

После посева среду заливают небольшим слоем вазелинового масла. Выросшие анаэробы вызывают помутнение питательной среды.

ФАГОИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ ПО МЕТОДУ ОТТО (МЕТОД СТЕКАЮЩЕЙ КАПЛИ) 

На чашку с МПА шпателем выполняется посев суточной бульонной культуры бактерий. Затем наносят каплю известного бактериофага и, наклонив чашку, дают капле несколько растечься по поверхности питательной среды. Через сутки наблюдают полную задержку роста в месте внесения диагностического фага.

ФАГОТИПИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ ПО МЕТОДУ ФИШЕРА 

Испытуемую суточную бульонную культуру засевают на МПА, затем условно делят чашку на квадраты. В каждый квадрат наносят по одной капле различных фагов. После суточной инкубации в термостате отмечают квадраты, в которых отмечается лизис бактерий. Фаготип бактериальной культуры определяется типом лизирующего ее фага.

СОВМЕСТНОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ АЭРОБОВ И АНАЭРОБОВ (МЕТОД ФОРТНЕРА) 

В чашке с сахарным агаром вырезается «траншея» («ров») для невозможности миграции, смешивания разных культур бактерий.

С одной стороны выполняется посев культуры аэробных бактерий, с другой – умеренно строгих анаэробов.

Чашка закрывается, ее края запаиваются парафином (с целью не допустить попадания воздуха, кислорода внутрь чашки). Сначала вырастают в присутствии кислорода аэробы, а затем – анаэробы.

ФАГОИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ ПО МЕТОДУ ФЮРТА 

В расплавленный и остуженный МПА (45-50 гр. С) добавляют определенный бактериофаг и выливают в чашку Петри. Чашка с полученным агаром делится на несколько секторов, в каждый из которых засеваются неизвестные культуры, выделенные от больных. Там, где культура соответствует бактериофагу, наблюдается отсутствие роста (лизис) бактерий.

ТИТРОВАНИЕ БАКТЕРИОФАГА ПО МЕТОДУ ГРАЦИА 1,0 мл фага смешивают в пробирке с 0,5 мл бактериальной культуры и добавляют в эту же пробирку расплавленный МПА. Все содержимое выливают в чашку с МПА.

Дают застыть верхнему тонкому слою и ставят в термостат. При встрече фага с бактерией, происходит лизис последней и образуется негативная колония фага. Такие негативные колонии затем подсчитывают для определения титра.

Титром фага называют количество фаговых частиц в 1 мл препарата фага.

ОПЫТ ВЫЯВЛЕНИЯ ФИТОНЦИДОВ ЧЕСНОКА 

Чашку с МПА равномерно засевают шпателем суточной бульонной культурой бактерий (например, стафилококка). В центр посева помещают дольку чеснока, предварительно измельченного. Инкубируют в термостате. Через сутки отчетливо видна зона отсутствия роста вокруг измельченного чеснока (стерильная зона).

Источник: //microbiogpmu.ucoz.ru/index/pitatelnye_sredy/0-22

Ваш Недуг
Добавить комментарий