Гистохимические методы исследования

Цитохимические или гистохимические методы

Гистохимические методы исследования

Совершенно четкой и определенной границы между общими методами окрашивания и цитохимическими реакциями провести нельзя.

Однако если задачу большинства общих методов окрашивания составляет выявление разнообразных клеточных структур и они неспецифичны для каких-либо определенных химических веществ, то цель цитохимических реакций заключается в определении именно химических веществ и их локализации в клетке.

Поэтому для цитохимических реакций пригодны лишь те методы фиксации, которые позволяют фиксировать и осаждать химические вещества в тех местах, где они располагаются в живых клетках. После фиксации химические вещества должны быть в таком состоянии, чтобы они не растворялись при дальнейшей обработке, не выходили бы из клетки и не меняли бы своего положения в пределах клетки.

Для цитохимических исследований пригодны препараты клеток, фиксированных всеми указанными выше фиксаторами, причем каждый раз фиксатор выбирается в соответствии с тем, какое вещество должно быть выявлено. Пригодны также срезы свежезамороженных тканей, мазки, пленки эпителия, а также материал, подвергнутый лиофилизации.

С помощью цитохимических реакций можно прежде всего выявить все основные неорганические компоненты клетки: К, Na, Fe, Са, Си, Р, Hg, S, N и др. Выявление неорганических компонентов осуществляется широко известными из неорганической химии, но несколько видоизмененными в применении к биологическим объектам реакциями.

Белки. Белковые компоненты клеток можно определить, применяя многочисленные методы, большинство которых основано на определении отдельных аминокислот и реактивных групп, входящих в состав белковой молекулы.

К числу таких методов относятся: ксантопротеиновая реакция, указывающая на присутствие в белке тирозина, феннлаланина, триптофана; реакция Мил-лона на присутствие тирозина; реакция Серра на аргинин; реакция тетразоииевого сочетания на тирозин, триптофан и гистидин и реакции на выявление сульфгидрильных (-SH), дисульфидных (S-S), аминогрупп (NH2) и других реактивных групп белковых молекул. Окрашивание белков кислотными и основными красителями при разных значениях рН позволяет определить кислые и основные белки (например, гистоны).

Нуклеиновые кислоты. Цитохимические методы по выявлению нуклеиновых кислот основаны на реакциях трех основных компонентов; фосфорной кислоты, углеводов и оснований.

Один из методов окраски, который вместе с тем представляет и пример цитохимической реакции, уже был упомянут выше,– это окраска метиловым зеленым — пиронином по Браше.

Основу этой реакции составляет способность метилового зеленого и пиронина давать солеобразные соединения с фосфорной кислотой, входящей в состав молекул нуклеиновых кислот. К такому же типу реакций относится окраска нуклеиновых кислот галлоцианином, который окрашивает и ДИК и РНК в серовато-синий цвет.

Обе реакции не обладают достаточной степенью специфичности и требуют обязательного применения контроля, т. е. обработки препаратов ферментами; дезоксирибонуклеазой и рибонуклеазой. После действия первого фермента на препаратах не выявляется ДНК, а рибонуклеаза удаляет из клеток РНК, которая после обработки также не выявляется на контрольных препаратах.

Один из высокоспецифичных методов определения ДНК на мазках, тотальных препаратах и срезах представляет нуклеальная реакция Фельгена.

Эта реакция включает два этапа: 1) гидролиз в 1 /V растворе HCI, цель которого — превращение дезоксирибозы — составной части молекулы ДНК в альдегид и 2) окрашивание в реактиве Шиффа (фуксин-сернистая кислота), обладающем высокой степенью чувствительности к альдегидам.

Соединяясь с бесцветной фуксин-сернистой кислотой, альдегиды переводят ее в соединение, окрашенное в яркий красно-фиолетовый цвет.

Углеводы. Из углеводов, содержащихся в растительных и животных клетках, с помощью цитохимических методов можно выявить как моносахариды, например глюкозу, так и разнообразные полисахариды.

Цитохимический анализ полисахаридов основан на окислении их следующими окислителями: йодной кислотой, периодатом калия и натрия, хромовой кислотой.

Цель окисления – получение высокомолекулярных альдегидных соединений, которые затем выявляются реактивом Шиффа, подобно тому как это было только что указано для реакции Фельгена. Сама же реакция на полисахариды носит название реакции ШИК (Шифф-йодная кислота).

Реактив Шиффа окрашивает разнообразные полисахариды, например гликоген, в яркий красно-фиолетовый цвет. Одновременно с гликогеном реактив Шиффа окрашивает в такой же яркий цвет другие полисахариды, и особенно кислые, типа мукополисахаридов, мукопротеидов и др.

Для раздельного определения этих веществ используется приготовление контрольных препаратов, на которых гликоген удаляется из клеток обработкой птиалином слюны.

Вещества же типа мукополисахаридов, мукопротеидов и кислые полисахариды типа гиалуроновой кислоты требуют применения специальных методов определения. Одна из реакций на такие соединения уже была названа выше: это явление метахромазии.

Гликоген на мазках, тотальных препаратах и срезах можно определить также путем окрашивания йодом или раствором Люголя (йод – 1 г, К! – 2 г, дистиллированная вода – 300 мл). Под действием йода гликоген окрашивается в красно-бурый или коричневый цвет.

Липоиды. Нейтральный жир, находящийся в, цитоплазме клеток, избирательно окрашивается красным Суданом III в оранжево-красный цвет и черным Суданом — в черный цвет. Судан черный окрашивает и другие структуры “клеток, в которых содержатся липоиды. Имеется также ряд методов для определения в клетке веществ, содержащих в своем составе липоиды, например холестерин.

Ферменты. В настоящее время методы цитохимии позволяют выявить около 50 различных ферментов, находящихся в клетках и тканях. Если при цитохимическом определении белков, нуклеиновых кислот, углеводов и липидов выявляются какие-то структурные части их молекул, то при определении ферментов выявляется их активность.

Для того чтобы обнаружить активность какого-либо фермента, клетки помещаются в среду, содержащую субстрат для данного фермента. Фермент расщепляет субстрат, а последний выбирается с таким расчетом, чтобы один из продуктов расщепления можно было выявить при помощи цветной реакции.

Очень важно, чтобы субстрат, участвующий в реакции, был хорошо растворим и легко проникал бы в клетку.

Напротив, окрашенные конечные или промежуточные продукты реакции, не должны быть растворимыми и должны располагаться именно в тех частях клетки, где они находятся в прижизненном состоянии, а не диффундировать в соседние клетки или в другие части одной и той же клетки.

Примером реакций определения ферментативной активности в клетках может служить реакция на сукцинатдегидрогеназу – важнейший фермент, участвующий в окислительно-восстановительных процессах.

Основу этой реакции составляет восстановление с помощью этого фермента бесцветной и хорошо растворимой соли тетразолия (биосубстрат) в почти нерастворимый формазан (конечный продукт реакции), окрашенный в синий или сине-фиолетовый цвет.

При цитохимическом определении активности гидролитических ферментов (фосфатазы, липазы и др.) в растворимые субстраты, которыми могут служить альфа и бетта-глицерофосфат, адено-зинтрифосфат и некоторые другие органические соединения, содержащие фосфор, добавляются ионы металлов.

В процессе расщепления таких субстратов ферментами окрашенные продукты реакции осаждаются в местах ферментативной активности в виде малорастворимых солей кальция, свинца, меди, кобальта и других металлов.

Источник: //studopedia.su/7_20225_tsitohimicheskie-ili-gistohimicheskie-metodi.html

Гистохимические методы исследования

Гистохимические методы исследования

методы идентификации химических веществ в гистологических срезах. Составной частью Г. м. и. являются цитохимические методы, выявляющие химические вещества в клетках приготовленных мазков и отпечатков. В основе Г. м. и.

лежит соединение принципов и методов химического анализа с принципами и методами морфологического изучения клеток и тканей, используемыми в цитологии и гистологии. Благодаря этому обеспечиваются существенные преимущества в изучении морфофункциональной организации растительных и животных тканей, т.к.

выявленное химическое вещество можно связать с определенной тканевой или клеточной структурой, т.е. установить его локализацию. Г. м. и. находят широкое применение в гистологии, цитологии, эмбриологии, патологической анатомии, экспериментальной и клинической морфологии.

С помощью разнообразных методов современной гистохимии можно судить об особенностях функционирования различных тканевых и клеточных структур, определять характер и темп обменных процессов в клетках и тканях, обнаруживать ранние проявления заболеваний.

Непременным условием проведения Г. м. и., особенно при выявлении ферментов и других веществ белковой природы, является сохранение структуры тканей и клеток в состоянии, близком тому, какое имеется в живом организме.

Это достигается получением срезов свежезамороженных тканей с помощью ножа глубокого охлаждения и криостата, а также использованием лиофильной сушки. Некоторые Г. м. и.

, например выявление углеводных соединений, можно проводить после специальной фиксации тканей и заливки в парафин.

БЛИЖНЕПОЛЬНЫЙ МИКРОСКОП

К настоящему времени создано около 20 типов БСОМ, различающихся особенностями оптической схемы и функциональным назначением зонда.

В зависимости от наличия или отсутствия диафрагмы на конце зонда их можно разбить на две основные группы: апертурные и безапертурные.

Принцип действия апертурных БСОМ, составляющих преобладающее большинство современных приборов, поясняет приведенная на рис. 2 блок-схема микроскопа.

Луч лазера (обычно гелий-неонового или аргонового) через согласующий элемент попадает в заостренное металлизированное волокно и на выходе сужается до размеров диафрагмы. Взаимное перемещение острия и образца в трех измерениях x, y, z осуществляется с помощью пьезодвижителей.

Прошедшие через образец или отраженные и рассеянные фотоны улавливаются одним из микрообъективов (2 или 1 соответственно, см. рис. 2) и направляются в регистрирующий прибор, обычно фотоумножитель.

Такой микрообъектив, как правило, входит в схему обыкновенного оптического микроскопа, что позволяет осуществить выбор исследуемого участка и его привязку к более широкому полю. Приведенная на рис. 2 схема относится к приборам, работающим в режиме освещения (illumination mode).

Широко распространены приборы, работающие в режиме сбора фотонов (collection mode), когда зонд переносит фотоны от образца, освещенного, например, через микрообъектив, к детектору. В комбинированном режиме (освещение / сбор) зонд выполняет одновременно обе функции.

Чтобы установить острие на нужной высоте над образцом, во всех сканирующих зондовых микроскопах используют зависимость величины I регистрируемого сигнала от z.

В большинстве типов БСОМ зависимость I(z) неоднозначна, поскольку наряду с ближнепольным сигналом I1 регистрируется также периодически изменяющийся с z сигнал I2 , вызванный интерференцией падающей и переотраженных в системе зонд-образец волн.

Это затрудняет или делает полностью невозможным надежный контроль z по величине I = I1 + I2 при сближении острия с образцом.

Лучшим решением проблемы является введение в БСОМ вспомогательных узлов, позволяющих им осуществлять также функции сканирующего туннельного или атомно-силового микроскопов, в которых определение z не вызывает существенных трудностей.

В таких комбинированных приборах запись изображения осуществляется одновременно по двум каналам, один из которых воспроизводит рельеф поверхности, а другой – локальное распределение показателя преломления в тончайшем приповерхностном слое. Возможность различения оптического и топографического контрастов существенно упрощает интерпретацию изображения. Наибольшее распространение получил метод контроля z, основанный на изменении тангенциальной составляющей силы физического взаимодействия острия с образцом (shear force).

РАЗРЕШАЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬ БЛИЖНЕПОЛЬНЫХ МИКРОСКОПОВ

Основной характеристикой БСОМ является пространственное разрешение, которое в сильной степени зависит от условий освещения или в более общем случае – от наблюдения образца, структуры его поверхности и микрогеометрии зонда. Известно, что функция импульсного отклика дифракционно-ограниченной оптической системы описывается распределением Эри.

Полуширина главного максимума распределения соответствует разрешению по Рэлею: Dx = 0,61l / sin j, где j – апертурный угол. В пределе при j p /2 Dx Dxmin = 0,61l.

При прохождении света через малую диафрагму из-за рассеяния и геометрических ограничений происходит искажение и расширение Df спектра переносимых пространственных частот, которое также описывается распределением Эри Df = 0,61/ a.

В результате при a 0 волновое поле непосредственно за диафрагмой содержит сколь угодно большие пространственные частоты и как следствие этого Dxmin 0. В реальной ситуации из-за конечной проницаемости металлического экрана (покрытия) минимальный эффективный радиус диафрагмы определяется глубиной проникновения света в металл или толщиной d скин-слоя.

С учетом этого ожидаемое предельное разрешение, например, для зонда с алюминиевым покрытием в видимом диапазоне спектра составляет Dxmin ї 2d ї ї 13 нм, что соответствует лучшим экспериментальным результатам. Отсутствие физических ограничений размера вершины зонда в безапертурных БСОМ позволяет реализовать в них разрешение лучше 1 нм.

Флюоресцентный (флуоресцентный) микроскоп (лат. fluo — течь, греч. μικρός — маленький и греч.

σκοπέω — смотрю) — специализированный световой микроскоп, предназначенный для изучения свойств органических или неорганических веществ с использованием явления флюоресценции (люминесценции) с возможностью исследования свечения под действием УФ-излучения, в отражённом или проходящем освещении.

[1][2] Это лабораторная оптическая система для получения увеличенных изображений сверхмалых объектов с разрешающей способностью 1-10нм, с использованием различного характера свечения малых структурных элементов объекта под действием возбуждающего лазерного облучения.

Микроскоп используется, например, для исследования живых клеток, с выдачей оцифрованных цветных стереизображений на экран 3D монитора. Современный флюоромикроскоп рассчитан на применении исследования эпитаксиального слоя методом передачи изображения, созданного и отражённого при флюромикроскопии.

Основой конструкции данного микроскопа является возможность применения вертикального потока лучей в диапазоне длин волн ультрафиолетовых, синих или зелёных лучей видимого спектра света, который образуется, передаётся многоспектральными источниками света, например, лампой дуги или другими источником с длиной волны, отфильтрованный фильтром лучей возбуждения. Данный поток лучей, отражаясь от фильтра — дихроического зеркала или светоделителя, проходит через исследуемый образец (цель), обильно его освещая. При отражении и возврате лучей света эмиссии (возбуждения) он проходит через двуцветное зеркало, фильтруется фильтром, который блокирует нежелательные длины волн возбуждения. В данном случае флюоресценция — единственный способ в оптической микроскопии, когда исследуемый образец вслед за возбуждением начинает светиться своим собственным светом. Излучаемый им свет повторно исходит сферически во всех указанных направлениях и не зависит уже от действия источника лучей света возбуждения.Эпифлюоресцентная микроскопия дает возможность непосредственно наблюдать враще ние субъединиц друг относительно друга в сложных белках.

Конфокальная микроскопия — один из методов оптической микроскопии, обладающий значительным контрастом по сравнению с микроскопами классической схемы за счет использования диафрагмы, отсекающей поток фонового рассеяного света.

В конфокальном микроскопе в каждый момент времени регистрируется изображение одной точки объекта, а полноценное изображение строится путем сканирования (движения образца или перестройки оптической системы).

Для того, чтобы регистрировать свет только от одной точки после объективной линзы располагается диафрагма малого размера таким образом, что свет, испускаемый анализируемой точкой , проходит через диафрагму и будет зарегистрирован, а свет от остальных точек в основном задерживается диафрагмой.

Наиболее часто встречающейся задачей для конфокальной микроскопии, благодаря ее высокому разрешению и контрасту, является изучение структуры клеток и их органелл, например, цитоскелета, ЭПР, лизосом, митохондрий, ядра, хромосом и даже генов. Исследуется также колокализация в клетке двух и более веществ.

Еще одна задача – исследование динамических процессов, происходящих в живых клетках. Например, клеточного транспорта биологически-активных соединений, изменений концентрации и распределения ионов кальция. Записав в памяти компьютера серию оптических срезов, можно провести объемную реконструкцию объекта и получить его трехмерное изображение, не используя трудоемкую методику изготовления и фотографирования серийных гистологических срезов.

Развитием рентгеновского просвечивания является метод фазовой дисперсионной интроскопии (радиографии), который применяется к анализу мягких тканей биологических объектов. Рассмотрим схему метода. Рентгеновский коллимированный пучок двумя монохроматорами формируется в параллельный широкий поток рентгеновских лучей, который проходит через объект.

В нем он ослабляется за счет частичного поглощения и, главное, преломляется из-за неоднородного распределения плотности вещества в объекте, что приводит к изменению фазы волны в плоскости волнового фронта за объектом. Прошедшее излучение анализируется высокосовершенным кристаллом-анализатором.

Это фазово-модулированное излучение испытывает дифракционное рассеяние, характер которого зависит как от ориентации анализатора, так и от сложного интерференционного поведения поля на его поверхности. Отраженный (R ) и прошедший (T ) пучки регистрируются рентгеновской пленкой.

Эта техника близка к интерферометрической схеме , когда в один из разделенных пучков вставляется исследуемый объект. В новой схеме изменяется угол кристалла-анализатора по отношению к направлению падающего пучка, что позволяет подбирать лучший контраст в изображении объекта.

Малейшие изменения фазы волны приводят к значительному усилению контраста изображения по сравнению с обычным просвечиванием. Высокая фазовая чувствительность метода находится вне конкуренции с другими методами, что обеспечивает ему блестящую перспективу в диагностике раковых образований на ранних стадиях.

ЭЛЕКТРОННАЯМИКРОСКОПИЯ, совокупность электронно-зондовых методов исследования микроструктуры твердых тел, их локального состава и микрополей (электрических, магнитных и др.) с помощью электронных микроскопов (ЭМ) – приборов, в к-рых для получения увелич.

изображений используют электронный пучок. Электронная микроскопия включает также методики подготовки изучаемых объектов, обработки и анализа результирующей информации. Различают два гл.

направления электронной микроскопии: трансмиссионную (просвечивающую) и растровую (сканирующую), основанных на использовании соответствующих типов ЭМ. Они дают качественно разл. информацию об объекте исследования и часто применяются совместно.

Известны также отражательная, эмиссионная, оже-электронная, лоренцова и иные виды электронной микроскопии, реализуемые, как правило, с помощью приставок к трансмиссионным и растровым ЭМ.

Рекомендуемые страницы:

Воспользуйтесь поиском по сайту:

Источник: //megalektsii.ru/s31705t9.html

Иммуногистохимические методы исследования нервной системы

Гистохимические методы исследования

Иммуногистохимия – это комплекс методов исследования тканей, основанный на способности иммунной системы позвоночных (главным образом, млекопитающих и птиц) вырабатывать специфические белки – антитела, способные избирательно связываться с конкретными веществами (антигенами). В организме антитела используются, главным образом, для идентификации и нейтрализации патогенов.

Особенность работы иммунной системы такова, что в теории антитела могут быть выработаны против практически любых химических соединений. Чем крупнее молекула антигена, тем быстрее и лучше будут вырабатываться антитела.

Таким образом можно выработать антитела против интересующего вещества, выделить их из общей сыворотки и использовать для обнаружения этого вещества в клетках и тканях самых разных организмов.

Методы иммуногистохимических исследований не новы. Начало им было положено в 30-е годы ХХ века, когда удалось получить меченные красителем антитела, которые реагировали с соответствующими антигенами и окрашивали их.

В начале 40-х годов были получены антитела, конъюгированные с флуоресцентной меткой. Исследования проводились с использованием обычного флуоресцентного микроскопа.

Появление же конфокального микроскопа значительно расширило возможности этого метода и позволив анализировать трехмерное строение интересующих структур.

Антитела представляют собой гликопротеины, которые выделяют в особую группу иммуноглобулинов. Молекулы антител состоят из пары одинаковых тяжелых и пары одинаковых же легких полипептидных цепей. Соответственно, каждая молекула антител содержит два одинаковых антигенсвязывающих участка, распознающих соответствующий антиген и связывающийся с ним.

Антитела вырабатываются В-лимфоцитами, при этом каждая отдельная линия В-лимфоцитов производит лишь один тип антител, распознающих один определенный эпитоп.

Вследствие этого антитела принято делить на моноклональные (произведенные одной единственной линией клеток и распознающие один-единственный эпитоп) и поликлональные (произведенные лимфоцитами различных линий и распознающих, предположительно, различные эпитопы, предположительно одного антигена).

Моноклональные антитела более специфичные, чем поликлональные, однако производство их обходится существенно дороже. Поэтому чаще всего для исследовательских целей используют поликлональные антитела.

Сами по себе антитела не окрашены и не обладают способностью к флуоресценции. Существует несколько различных способов визуализации в иммуногистохимии, основывающихся на присоединении флуоресцентной или хромогенной метки к молекулам антител. Метка пришивается непосредственно на антитела, выработанные против конкретного антигена.

Существует другой способ – так называемый непрямой иммуногистохимический метод. Он более чувствителен и гибок в работе. Заключается он в использовании двух различных антител: первичных и вторичных. Первичные антитела вырабатываются против конкретного антигена, который необходимо детектировать. Это – чистые, ни с чем не конъюгированные антитела.

Вторичные же антитела вырабатываются против белков организма, из которого были получены первичные антитела. К ним и присоединяются молекулы-метки. В ходе реакции вторичные антитела находят прикрепленные к антигену первичные антитела и связываются с ними. Для выполнения метода образец сначала инкубируют с первичными антителами, а затем с вторичными.

Данная методика не только более чувствительна, но также позволяет использовать с одними и теми же первичными антителами различные метки для различных ситуаций. Вторичные антитела с одним типом метки можно использовать с различными первичными антителами.

Следует лишь учитывать, что первичные антитела должны быть произведены в животных того вида, против которого выработаны вторичные антитела.

Один и тот же объект можно маркировать антителами против нескольких различных антигенов. Количество их, в теории, ограничено лишь количеством видов животных-хозяев, против которых вырабатываются вторичные антитела и спектральными характеристиками красителей.

Следует помнить, что если первичные антитела против различных веществ были выработаны в животных одного и того же вида (например, в кроликах), то использовать их в одном эксперименте невозможно.

Связано это с тем, что при дальнейших обработках, одни и те же вторичные антитела свяжутся со всеми первичными антителами и понять, какие вещества в итоге будут выявлены, станет невозможным.

Кроме того, не следует использовать в одном эксперименте различные вторичные антитела с флуоресцентными метками, имеющими одинаковые или очень схожие спектры поглощения/эмиссии – это может привести к сложности или даже полной невозможности качественного разделения флуоресцентных сигналов.

Метка флуоресцентными антителами хорошо сочетается с большинством часто используемых флуоресцентных методик, таких как мечение фибриллярного актина фаллоидином или окраска ядер красителем DAPI. Кроме того, можно комбинировать методы флуоресцентной иммуногистохимии с хромогенными методами детекции, используемыми при РНК-гибридизации in situ.

Поскольку антитела – довольно крупные молекулы (IgG имеет молекулярную массу около 150 кДа), иногда может возникнуть проблема доставки их внутрь клеток, да и вообще внутрь организма. Для решения этой проблемы обычно используют две группы подходов.

Первая группа подходов заключается в незначительном повреждении мембран исследуемого образца с использованием детергентов. Обычно для этих целей используется Triton X-100 в концентрации от 0,05% до 5%. Наиболее часто используемая концентрация – 0,1%.

В некоторых случаях, при работе с организмами, имеющими плотную кутикулу, такими как нематоды или членистоногие, необходимо механическое повреждение кутикулы. Повреждения можно нанести механически, например скальпелем, либо непродолжительным воздействием ультразвука.

Также в некоторых случаях можно применять предварительную ферментативную обработку объектов с использованием протеаз, хитиназ или коллагеназ.

Альтернативная группа подходов заключается в уменьшении размера самих молекул антител.

Тяжелые цепи имеют так называемый шарнирный участок, по которому при помощи фермента папаина можно разрезать молекулу антитела на три фрагмента: два Fab-фрагмента (непосредственно антиген-связывающие фрагменты – fragment antigen binding) и один Fc-фрагмент (фрагмент способный к кристаллизации – fragment crystallizable).

Fab-фрагменты гораздо легче проникают внутрь клеток. Такой вариант чаще всего используется при нефлуоресцентной детекции, когда вместо молекулы флюорофора к фрагменту антитела пришивается фермент щелочная фосфатаза. Данный вариант детекции используется главным образом при проведении РНК-гибридизации in situ.

Источник: //www.zin.ru/projects/neuromorphology/methods/immuno.html

Медицинская энциклопедия – значение слова Гистохими́ческие Ме́тоды Иссле́дования

Гистохимические методы исследования

(синоним топохимические методы исследования)методы идентификации химических веществ в гистологических срезах. Составной частью Г. м. и. являются цитохимические методы, выявляющие химические вещества в клетках приготовленных мазков и отпечатков. В основе Г. м. и.

лежит соединение принципов и методов химического анализа с принципами и методами морфологического изучения клеток и тканей, используемыми в цитологии и гистологии. Благодаря этому обеспечиваются существенные преимущества в изучении морфофункциональной организации растительных и животных тканей, т.к.

выявленное химическое вещество можно связать с определенной тканевой или клеточной структурой, т.е. установить его локализацию. Г. м. и. находят широкое применение в гистологии, цитологии, эмбриологии, патологической анатомии, экспериментальной и клинической морфологии.

С помощью разнообразных методов современной гистохимии можно судить об особенностях функционирования различных тканевых и клеточных структур, определять характер и темп обменных процессов в клетках и тканях, обнаруживать ранние проявления заболеваний. Непременным условием проведения Г. м. и.

, особенно при выявлении ферментов и других веществ белковой природы, является сохранение структуры тканей и клеток в состоянии, близком тому, какое имеется в живом организме. Это достигается получением срезов свежезамороженных тканей с помощью ножа глубокого охлаждения и криостата, а также использованием лиофильной сушки. Некоторые Г. м. и.

, например выявление углеводных соединений, можно проводить после специальной фиксации тканей и заливки в парафин. Многие Г. м. и. являются групповыми, т.е. служат для обнаружения соединений с одинаковыми или близкими свойствами. Другие Г. м. и. строго специфичны и применяются для выявления определенных веществ.

Для обнаружения углеводных соединений широко используются методы, основанные на метахромазии — свойстве клеток и тканей окрашиваться в цвет, отличающийся от цвета красителя. Метахромазия обусловлена полимеризацией молекул красителя под влиянием свободных отрицательных зарядов гликозаминогликанов (кислых мукополисахаридов), присутствующих в ткани.

К высокоспецифичным относятся гистохимические методы выявления ферментов. В их основу положено воздействие фермента на специфический субстрат в присутствии другого вещества, называемого захватывающим агентом (акцептором).

Соединяясь с первичным продуктом ферментативной реакции, акцептор образует нерастворимый, обычно окрашенный, осадок — конечный продукт реакции, который маркирует место действия фермента. В качестве акцепторов применяют ионы металлов, соли диазония и другие соединения.

Ионы металлов обладают высокой электронной плотностью, поэтому могут быть обнаружены при электронно-микроскопическом исследовании. Это свойство используется в электронной гистохимии.

Для определения в тканевом срезе дегидрогеназ применяют соли тетразолия, которые в присутствии специфического субстрата восстанавливаются с превращением в нерастворимые окрашенные продукты — формазаны. Оценка результатов гистохимических реакций, основанная на избирательном окрашивании структур или выпадении окрашенного продукта реакции, может быть не только качественной, но и количественной при использовании цито-спектрофотометрии. Возможна также визуальная полуколичественная оценка интенсивности окрашивания в баллах.

Библиогр.: Берстон М. Гистохимия ферментов, пер. с англ.. М., 1965; Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия, пер. с англ., М., 1969; Пирс Э. Гистохимия, пер. с англ., М., 1962; Принципы и методы гистоцитохимического анализа в патологии, под ред. А.П. Авцына и др., Л., 1971, библиогр.

Смотреть значение Гистохими́ческие Ме́тоды Иссле́дования в других словарях

Методы Политологии — (гр. methodos путь исследования) – средства анализа, способы проверки и оценки политической теории. Основные типы методов и уровни методологии политических исследований……..
Политический словарь

Административно-правовые Методы Управления Рисками — – методы управления, основанные на привлечении к административной ответственности лиц, виновных в причинении организации или ее работниками неправомерного вреда

Экономический словарь

Административные Методы Управления — способы и формы управления, в основе которых лежит голое администрирование, распорядительство, опирающееся на приказы, распоряжения, спускаемые сверху установки.

Экономический словарь

Административные Методы Управления Рисками — – методы управления, действие которых основано на силовом принуждении

Экономический словарь

Гражданско-правовые Методы Управления Рисками — – методы управления, основной задачей применения которых является возмещение вреда, нанесенного предприятию в результате совершения противоправных……..

Экономический словарь

Дизайн Маркетингового Исследования — – 1) проектирование и конструирование процесса маркетингового исследования, его модели; разработка рационального плана для проведения исследования, проведения работ……..
Экономический словарь

Директивные Методы Управления — методы, основанные на том, что субъект управления, управляющий орган вырабатывает директивы, команды, распоряжения, подлежащие неукоснительному исполнению……..

Экономический словарь

Дисциплинарные Методы Управления Рисками — – методы управления, механизм действия которых основан на привлечении к внутренней дисциплинарной ответственности работников организации, виновных……..

Экономический словарь

Другие Методы Всеобъемлющего Учета — OTHER COMPREHENSIVE METHODS OF ACCOUNTINGФин. отчетность, составленная на основе всестороннего охвата учетом деятельности предприятия (др. методы учета – ДМУ), но иной нежели ОБЩЕПРИНЯТЫЕ……..
Экономический словарь

Запрещенные Методы Ведения Войны — – установлены в Женевских конвенциях о защите жертв войны 1949 г., Дополнительных протоколах к ним 1977 г. и др. К З.м.в.в. относятся: предательское убийство или ранение лиц,……..
Экономический словарь

Затраты На Научные Исследования И Опытно-конструкторские Разработки — – затраты, относящиеся к созданию новой или усовершенствованию производимой продукции (товаров, работ, услуг), включая затраты на изобретательство. Затраты признаются……..

Экономический словарь

Игровые Методы — методы психологической подготовки управленческого персонала, включающие деловые игры.

Экономический словарь

Исследования (research) — Оригинальные и плановые научные изыскания, предпринимаемые с перспективой получения новых научно-технических знаний.
Экономический словарь

Исследования Аудитории — – исследования, в результате которых появляются статические данные о количестве зрителей телеканала в определенный период времени в течение отдельной передачи……..

Экономический словарь

Исследования Бюджета Времени — Исследования распределения времени между различными видами деятельности (и досуга). Называются также «исследования использования времени» и «исследования распределения……..
Экономический словарь

Исследования Маркетинга — процесс сбора, обработки и анализа данных о рынке с целью принятия оптимальных решений.
Экономический словарь

Кабинетные Исследования — сбор и анализ данных официальной статистики, определенных предметом изучения.
Экономический словарь

Качественные И Количественные Исследования (qualitative And Quantitative Research) — Качественное исследование имеет дело с качественными характеристиками, т.е. обычно относится к процессу измерения (оценки) психологических или эмоциональных данных………
Экономический словарь

Количественные Методы — QUANTITATIVE METHODSВ связи со сложностью процесса управления менеджеры обратились к К.м. и приемам как средствам решения многих проблем. Такие методы часто называют АНАЛИЗОМ……..
Экономический словарь

Командные Методы Управления — методы, основанные на том, что субъект управления, управляющий орган вырабатывает директивы, команды, распоряжения, подлежащие неукоснительному исполнению……..

Экономический словарь

Компенсационные Методы Управления Рисками — – методы управления, применение которых направлено на частичное или полное возмещение потерь, понесенных организацией в ситуациях риска

Экономический словарь

Маркетинга Принципы И Методы — (principle and method of marketing) вытекают из сущности маркетинга. Основные принципы: а) обязательная ориентация на нужды, запросы, требования потребителя, их тщательный……..

Экономический словарь

Маркетинговые Исследования — см МАРКЕТИНГОВЫЙ АНАЛИЗ.
Экономический словарь

Методы Альтернативного Финансирования Риска — В управлении риском: все методы управления риском, которые могут составить конкуренцию коммерческому страхованию, например, самострахование, группы удержания……..

Экономический словарь

Методы Банковского Кредитования — – элемент кредитного механизма, отражающий характер движения ссуженных средств. Различаются два метода кредитования – по обороту и по остатку.

Экономический словарь

Методы Борьбы С Кассово-расчетными Мошенничествами — Для того, что бы в кассово-расчетных центрах банков минимизировать возможность махинаций необходимо: – Проводить частые необъявленные пересчеты наличных денег……..

Экономический словарь

Методы Интеграции Преступно Полученных Доходов — продажа недвижимости. искажение цен внешнеторговых сделок; сделки с занижением цены. сделки с завышением цены; трансферпрайсинг; использование банковских счетов иностранной……..
Экономический словарь

Методы Исследования — – методы управления, преимущественно предназначенные для сбора и обобщения информации о текущем состоянии внешней и внутренней среды организации

Экономический словарь

Методы Контроля Риска — В управлении риском: способы управления риском, используемые для того, чтобы минимизировать частоту или серьезность ущерба, который может произойти в результате случайных……..
Экономический словарь

Методы Моделирования — – методы принятия управленческих решений, базирующиеся на использовании математических моделей для решения наиболее часто встречающихся управленческих задач………

Экономический словарь

Посмотреть в Wikipedia статью для Гистохими́ческие Ме́тоды Иссле́дования

Источник: //slovariki.org/medicinskaa-enciklopedia/7891

Ваш Недуг
Добавить комментарий